| 摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 第一章 试剂及仪器 | 第8-10页 |
| 1.1 肺组织来源 | 第8页 |
| 1.2 试剂与耗材 | 第8-9页 |
| 1.3 仪器 | 第9-10页 |
| 第二章 方法 | 第10-22页 |
| 2.1 主要试剂的配制 | 第10-12页 |
| 2.1.1 磷酸盐缓冲液PBS溶液的配制 | 第10页 |
| 2.1.2 20%胎牛血清的α-MEM培养基的配制 | 第10页 |
| 2.1.3 10%胎牛血清的α-MEM培养基的配制 | 第10页 |
| 2.1.4 5%胎牛血清的α-MEM培养基的配制 | 第10页 |
| 2.1.5 细胞冻存液的配制 | 第10页 |
| 2.1.6 柠檬酸溶液的配制 | 第10页 |
| 2.1.7 配制各种不同浓度组的TGFF-β_1 | 第10-11页 |
| 2.1.8 MTT溶液的配制 | 第11页 |
| 2.1.9 0.3%Trition-100溶液的配制 | 第11页 |
| 2.1.10 4%多聚甲醛溶液的配制 | 第11页 |
| 2.1.11 2%琼脂糖凝胶的配制 | 第11页 |
| 2.1.12 1×转膜液的配制 | 第11页 |
| 2.1.13 buffer的配制 | 第11页 |
| 2.1.14 电泳缓冲液的配制 | 第11页 |
| 2.1.15 1×转膜液的配制 | 第11-12页 |
| 2.1.16 1×PBST的配制 | 第12页 |
| 2.1.17 一抗稀释液的配制 | 第12页 |
| 2.2 支气管哮喘肺成纤维细胞的原代培养 | 第12-15页 |
| 2.2.1 肺组织的无菌切取 | 第12页 |
| 2.2.2 支气管肺成纤维细胞组织块贴壁法培养 | 第12-13页 |
| 2.2.3 支气管肺成纤维细胞胰酶消化法原代培养 | 第13页 |
| 2.2.4 细胞计数法 | 第13-14页 |
| 2.2.5 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的传代培养 | 第14页 |
| 2.2.6 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的纯化 | 第14页 |
| 2.2.7 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的冻存 | 第14-15页 |
| 2.2.8 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的复苏 | 第15页 |
| 2.3 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的鉴定 | 第15-16页 |
| 2.4 四甲基偶氮唑盐(MTT法)微量比色法检测TGF-β1对支气管哮喘患者肺成纤维细胞作用影响 | 第16页 |
| 2.5 Westrn blot检测α-SMA蛋白的表达 | 第16-18页 |
| 2.5.1 细胞干预 | 第16-17页 |
| 2.5.2 细胞总蛋白的提取 | 第17页 |
| 2.5.3 检测α-SMA蛋白的表达 | 第17-18页 |
| 2.5.4 膜的再利用 | 第18页 |
| 2.6 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达水平 | 第18-21页 |
| 2.6.1 细胞干预 | 第18页 |
| 2.6.2 TRIzol法提取细胞总RNA | 第18-19页 |
| 2.6.3 RNA纯度与浓度的测定 | 第19页 |
| 2.6.4 逆转录反应cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 2.6.5 PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.6.6 PCR产物观察 | 第21页 |
| 2.7 统计学处理 | 第21-22页 |
| 第三章 实验结果 | 第22-28页 |
| 3.1 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的原代培养 | 第22-23页 |
| 3.2 支气管哮喘患者肺成纤维细胞的鉴定 | 第23页 |
| 3.3 四甲基偶氮唑盐(MTT法)微量比色法检测TGF-β1对肺成纤维细胞作用影响 | 第23-25页 |
| 3.4 Westrn blot检测α-SMA蛋白表达结果 | 第25页 |
| 3.5 TGF-β_1对支气管哮喘患者成纤维细胞CollagenⅠ和CollagenⅢ的mRNA表达水平的影响 | 第25-28页 |
| 3.5.1 TGF-β_1对支气管哮喘患者成纤维细胞CollagenⅠmRNA表达水平的影响 | 第25-26页 |
| 3.5.2 TGF-β_1对支气管哮喘患者成纤维细胞Collagen ⅢmRNA表达水平的影响 | 第26-28页 |
| 第四章 讨论 | 第28-31页 |
| 第五章 结论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-34页 |
| 综述 | 第34-54页 |
| 综述参考文献 | 第46-54页 |
| 攻读学位期间成果 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
