| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-14页 |
| 1.1 衣壳蛋白靶向灭活策略 | 第9-11页 |
| 1.2 猪 2 型圆环病毒 | 第11-13页 |
| 1.2.1 PCV2 流行病学调查 | 第11页 |
| 1.2.2 PCV2 病原特征 | 第11页 |
| 1.2.3 常用 PCV2 实验室诊断方法 | 第11-13页 |
| 1.3 CTVI 策略应用于 PCV2 的理论基础 | 第13页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第13-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-34页 |
| 2.1 材料 | 第14-18页 |
| 2.1.1 质粒载体、毒株、菌株及细胞系 | 第14页 |
| 2.1.2 JNPC 基因重新设计并合成 | 第14页 |
| 2.1.3 PCR 引物合成 | 第14-15页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第15-18页 |
| 2.2 研究方案 | 第18-34页 |
| 2.2.1. pIRESNeo 中 IRESNeo 片段的扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2 PCR 产物的回收与克隆 | 第19-20页 |
| 2.2.3 阳性克隆的菌落 PCR 鉴定及重组质粒的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.4 重组质粒的酶切鉴定以及序列测定与比对 | 第21页 |
| 2.2.5 pIRES-Neo（-IVS）质粒载体构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 pIRES-Neo-JNPC（-IVS），pIRES-Neo-cap（-IVS）重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.7 JNPC、cap 真核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.8 PK15 细胞培养与瞬时转染 | 第24-25页 |
| 2.2.9 RT-PCR 检测瞬时转染细胞中 mRNA | 第25-27页 |
| 2.2.10 PK15 转基因细胞系的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.11 转基因细胞基因组 DNA 的提取 | 第28页 |
| 2.2.12 转基因细胞系的 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.13 RT-PCR 检测转录产物的 mRNA | 第29-31页 |
| 2.2.14 融合蛋白核酸酶活性检测 | 第31页 |
| 2.2.15 病毒传代实验 | 第31-32页 |
| 2.2.16 半定量 PCR 检测各细胞系的抗病毒效果 | 第32-33页 |
| 2.2.17 荧光定量 PCR 检测各细胞系抗病毒效果 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-55页 |
| 3.1 JNPC、cap 真核表达载体的构建 | 第34-43页 |
| 3.1.1 pIRESNeo 中 IRESNeo 片段的扩增 | 第34页 |
| 3.1.2 pIRESNeo（-IVS）载体的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.3 pIRES-Neo（-IVS）-JNPC，pIRES-Neo(-IVS)-cap 质粒的构建 | 第36-39页 |
| 3.1.4 真核表达载体的构建及鉴定 | 第39-43页 |
| 3.2 真核表达载体瞬时转染 PK15 细胞及转录产物 mRNA 的 RT-PCR 检测 | 第43-44页 |
| 3.3 PK15 转基因细胞系建立及鉴定 | 第44-47页 |
| 3.3.1 PK15 转基因细胞系建立 | 第44页 |
| 3.3.2 转基因细胞系 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 RT-PCR 检测各细胞系中的 mRNA | 第45-47页 |
| 3.4 融合蛋白核酸酶活性检测 | 第47页 |
| 3.5 半定量 PCR 法检测融合基因结构的抗病毒效果 | 第47-50页 |
| 3.5.1 各样品病毒滴度半定量 PCR 分析 | 第47-48页 |
| 3.5.2 电泳结果 | 第48-49页 |
| 3.5.3 各代次扩增产物电泳 Volume | 第49页 |
| 3.5.4 各代次半定量 PCR 结果 | 第49-50页 |
| 3.5.5 数据分析结果 | 第50页 |
| 3.6 荧光定量 PCR 法检测各转基因结构抗病毒效果 | 第50-55页 |
| 3.6.1 标准曲线的制作 | 第50-52页 |
| 3.6.2 定量 PCR 扩增特异性分析 | 第52-53页 |
| 3.6.3 荧光定量 PCR 结果 | 第53-54页 |
| 3.6.4 定量分析结果 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 JNPC 基因的重新设计合成以及真核表达载体的改造 | 第55页 |
| 4.2 阳离子脂质体细胞转染 | 第55-56页 |
| 4.3 抗病毒效果检测 | 第56-59页 |
| 4.3.1 半定量 PCR 法检测抗病毒效果 | 第56-57页 |
| 4.3.2 实时荧光定量 PCR 方法检测抗病毒效果 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 在读期间发表的论文 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
