| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| 1.1 LC-PUFAs简介 | 第15-16页 |
| 1.1.1 LC-PUFAs概念 | 第15页 |
| 1.1.2 LC-PUFAs功能 | 第15-16页 |
| 1.1.3 LC-PUFAs来源 | 第16页 |
| 1.2 LC-PUFAs合成途径 | 第16-17页 |
| 1.3 LC-PUFAs合成途径中的关键酶-△6 去饱和酶 | 第17-18页 |
| 1.3.1 △6 去饱和酶的功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 △6 去饱和酶的酰基载体特异性 | 第18页 |
| 1.4 影响LC-PUFAs合成的代谢瓶颈 | 第18-21页 |
| 1.4.1 合成LC-PUFAs的底物差异性 | 第19-21页 |
| 1.4.2 合成LC-PUFAs的中间产物流向问题 | 第21页 |
| 1.5 PC的概念及合成途径 | 第21-23页 |
| 1.5.1 PC的概念及功能 | 第21-22页 |
| 1.5.2 PC的合成途径 | 第22-23页 |
| 1.6 LPCAT的概念及功能 | 第23-26页 |
| 1.6.1 LPCAT的概念 | 第23页 |
| 1.6.2 LPCAT的催化方式简介 | 第23-24页 |
| 1.6.3 LPCAT对溶血磷脂酰胆碱的影响 | 第24-25页 |
| 1.6.4 LPCAT对磷脂酰胆碱的影响 | 第25页 |
| 1.6.5 LPCAT对甘油三酯的影响 | 第25-26页 |
| 1.7 LPCAT的研究进展 | 第26-29页 |
| 1.7.1 酵母LPCAT的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.7.2 植物LPCAT的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.7.3 动物LPCAT的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.8 本课题的研究意义和内容 | 第29-31页 |
| 第二章 烟草溶血磷脂酰基转移酶基因的克隆及鉴定 | 第31-56页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料及仪器设备 | 第32-35页 |
| 2.2.1 植株和菌种及载体 | 第32页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.2.4 培养基及缓冲液 | 第33-34页 |
| 2.2.5 引物及测序 | 第34-35页 |
| 2.2.6 生物分析软件及网站 | 第35页 |
| 2.3 实验方法及步骤 | 第35-42页 |
| 2.3.1 烟草发芽培养与前处理 | 第35页 |
| 2.3.2 烟草RNA提取与cDNA获得 | 第35-36页 |
| 2.3.3 烟草溶血磷脂酰基转移酶基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.4 烟草NbLPCATs在酿酒酵母中异源表达 | 第37-39页 |
| 2.3.5 烟草NbLPCATs功能验证 | 第39页 |
| 2.3.6 烟草NbLPCATs对外源底物在酵母磷脂中分布的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.7 烟草NbLPCATs体外酶活鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.8 Real-Time PCR检测烟草NbLPCATs基因表达模式 | 第41-42页 |
| 2.4 结果与分析 | 第42-54页 |
| 2.4.1 烟草溶血磷脂酰基转移酶基因的克隆及序列分析 | 第42-46页 |
| 2.4.2 LysoPAF敏感实验验证烟草NbLPCATs功能 | 第46-48页 |
| 2.4.3 烟草NbLPCATs对外源底物在酵母磷脂中分布的影响 | 第48-49页 |
| 2.4.4 烟草NbLPCATs底物偏好性分析 | 第49-52页 |
| 2.4.5 烟草NbLPCATs基因表达模式分析 | 第52-54页 |
| 2.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 烟草LPCAT对不同生长时期酵母磷脂组成的影响 | 第56-64页 |
| 3.1 引言 | 第56页 |
| 3.2 实验材料及仪器设备 | 第56-57页 |
| 3.2.1 植株和菌种及载体 | 第56页 |
| 3.2.2 主要实验试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第57页 |
| 3.2.4 培养基及缓冲液 | 第57页 |
| 3.3 实验方法及步骤 | 第57-58页 |
| 3.3.1 不同生长时期重组酵母的取样和收集 | 第57页 |
| 3.3.2 重组酵母细胞总脂提取 | 第57-58页 |
| 3.3.3 质谱条件 | 第58页 |
| 3.3.4 数据处理及分析 | 第58页 |
| 3.4 结果与分析 | 第58-62页 |
| 3.4.1 酵母生长曲线绘制 | 第58-59页 |
| 3.4.2 对数期酵母磷脂成分分析 | 第59-60页 |
| 3.4.3 稳定期酵母磷脂成分分析 | 第60-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 不同脂肪酸去饱和酶和延长酶与LPCAT组合表达及功能验证 | 第64-80页 |
| 4.1 引言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验材料及仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.2.1 植株和菌种及载体 | 第65页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第65页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第65页 |
| 4.2.4 培养基及缓冲液 | 第65页 |
| 4.2.5 引物及测序 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法及步骤 | 第66-70页 |
| 4.3.1 三角褐指藻的培养与前处理 | 第66页 |
| 4.3.2 三角褐指藻RNA提取和cDNA获得 | 第66页 |
| 4.3.3 三角褐指藻溶血磷脂酰基转移酶基因的克隆 | 第66-67页 |
| 4.3.4 三角褐指藻PtLPCAT在酿酒酵母中异源表达 | 第67页 |
| 4.3.5 三角褐指藻PtLPCAT功能验证 | 第67页 |
| 4.3.6 不同类型重组酵母的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.7 不同类型重组酵母的功能验证 | 第68-69页 |
| 4.3.8 LPCAT对转基因合成LC-PUFAs的影响 | 第69-70页 |
| 4.4 结果与分析 | 第70-78页 |
| 4.4.1 三角褐指藻溶血磷脂酰基转移酶基因的克隆 | 第70页 |
| 4.4.2 LysoPAF敏感试验验证三角褐指藻PtLPCAT功能 | 第70-73页 |
| 4.4.3 不同类型重组酵母构建 | 第73-74页 |
| 4.4.4 不同类型重组酵母功能验证 | 第74-75页 |
| 4.4.5 LPCAT对转基因合成LC-PUFAs的影响 | 第75-78页 |
| 4.5 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 LPCAT对转基因合成LC-PUFAs的重组酵母脂质组的影响 | 第80-91页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 实验材料及仪器设备 | 第80-81页 |
| 5.2.1 植株和菌种及载体 | 第80页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第80-81页 |
| 5.2.3 主要仪器设备 | 第81页 |
| 5.2.4 培养基及缓冲液 | 第81页 |
| 5.3 实验方法及步骤 | 第81-82页 |
| 5.3.1 不同类型重组酵母培养和收集 | 第81页 |
| 5.3.2 不同类型重组酵母细胞总脂提取 | 第81页 |
| 5.3.3 液相色谱分离条件 | 第81-82页 |
| 5.3.4 质谱条件 | 第82页 |
| 5.3.5 数据处理及分析 | 第82页 |
| 5.4 结果与分析 | 第82-88页 |
| 5.4.1 原始色谱图的可视化检测 | 第82-83页 |
| 5.4.2 基于LC-MS的脂质组学分析 | 第83-85页 |
| 5.4.3 不同类型重组酵母间差异脂质代谢物分析 | 第85-86页 |
| 5.4.4 脂肪酸去饱和酶中间代谢产物差异脂质热图分析 | 第86-88页 |
| 5.5 讨论 | 第88-91页 |
| 第六章 全文结论 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
