| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 副猪嗜血杆菌研究背景 | 第15-21页 |
| 1.1.1 副猪嗜血杆菌概述 | 第15-19页 |
| 1.1.2 病原学及血清学 | 第19-20页 |
| 1.1.3 副猪嗜血杆菌致病机理 | 第20-21页 |
| 1.1.4 副猪嗜血杆菌防治 | 第21页 |
| 1.2 细胞致死膨胀毒素的研究进展 | 第21-25页 |
| 1.2.1 CDT的简介 | 第21-22页 |
| 1.2.2 CDT的结构及酶活性 | 第22-23页 |
| 1.2.3 CDT的毒性作用 | 第23-24页 |
| 1.2.4 CDT的致病作用 | 第24-25页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 | 第27-37页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.2.4 溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.3 方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 PK-15细胞总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.2 PK-15细胞cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 2.3.3 长距离PCR(LD-PCR)扩增双链cDNA | 第29页 |
| 2.3.4 dscDNA的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.5 Y187酵母感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.3.6 纯化后的dscDNA与pGADT7-Rec共转化至Y187酵母感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.7 文库质量检测 | 第31-32页 |
| 2.4 结果 | 第32-34页 |
| 2.4.1 PK-15细胞总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.4.2 dscDNA的扩增及纯化 | 第32-33页 |
| 2.4.3 文库的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5 讨论 | 第34-37页 |
| 3 副猪嗜血杆菌cdtA,cdtB,cdtC基因的酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 | 第37-45页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第37页 |
| 3.2.4 溶液的配制 | 第37-38页 |
| 3.3 方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 诱饵载体pGBKT7-cdtA、pGBKT7-cdtB、pGBKT7-cdtC的构建 | 第38-41页 |
| 3.3.2 诱饵质粒的有效性检测 | 第41-42页 |
| 3.4 结果 | 第42-44页 |
| 3.4.1 cdtA,cdtB,cdtC基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 3.4.2 诱饵质粒的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4.3 诱饵载体pGBKT7-cdtA,pGBKT7-cdtB,pGBKT7-cdtC的毒性检测 | 第43页 |
| 3.4.4 诱饵载体pGBKT7-cdtA,pGBKT7-cdtB,pGBKT7-cdtC的自激活检测 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 4 CdtA、CdtB、CdtC互作蛋白的筛选及初步鉴定 | 第45-56页 |
| 4.1 前言 | 第45页 |
| 4.2 材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第45页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第45页 |
| 4.2.4 溶液的配制 | 第45-46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 4.3.1 酵母双杂交阴阳性对照实验 | 第46页 |
| 4.3.2 重组诱饵质粒与cDNA文库酵母双杂交筛选 | 第46-48页 |
| 4.3.3 阳性克隆的鉴定 | 第48-50页 |
| 4.3.4 酵母回复实验验证阳性克隆 | 第50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-54页 |
| 4.4.1 对照组实验结果 | 第50-51页 |
| 4.4.2 诱饵质粒与cDNA文库进行酵母双杂交的初步筛选 | 第51-52页 |
| 4.4.3 阳性克隆的PCR鉴定 | 第52页 |
| 4.4.4 阳性克隆的测序及生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 4.4.5 酵母回复性实验 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-56页 |
| 全文小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
