| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·禾谷镰刀菌生物学特征 | 第13-14页 |
| ·禾谷镰刀菌危害 | 第14-15页 |
| ·禾谷镰刀菌研究进展 | 第15-16页 |
| ·AMT1 基因研究背景 | 第16-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 AMT1 基因敲除盒的构建 | 第22-33页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第22-24页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-29页 |
| ·PH-1 基因组DNA 的提取——CTAB 法 | 第24-25页 |
| ·质粒pC81003 的制备 | 第25-26页 |
| ·禾谷镰刀菌AMT1 基因序列的获得与引物设计 | 第26-27页 |
| ·Split PCR 方法构建AMT1 基因敲除盒 | 第27-29页 |
| ·PCR 产物浓缩 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·AMT1 基因及蛋白序列分析 | 第29-30页 |
| ·AMT1 基因敲除盒的构建 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 AMT1 基因敲除和转化子的鉴定 | 第33-41页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-35页 |
| ·仪器 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-39页 |
| ·野生型禾谷镰刀菌原生质体的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·amt1 敲除突变体的筛选和鉴定 | 第36-39页 |
| ·结果 | 第39-40页 |
| ·PCR 检测得到4 个阳性转化子 | 第39页 |
| ·southern blot 验证得到2 个amt1 缺失突变体 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 amt1 敲除突变体的表型观察和致病力检测 | 第41-48页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-43页 |
| ·菌落形态观察及生长速度测定 | 第42页 |
| ·产孢率测定 | 第42页 |
| ·萌发实验 | 第42页 |
| ·有性杂交 | 第42页 |
| ·过氧化氢压力筛选试验 | 第42-43页 |
| ·小麦穗接种试验 | 第43页 |
| ·玉米须接种试验 | 第43页 |
| ·玉米杆接种试验 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·amt1 缺失突变体表型变化 | 第43-45页 |
| ·基因AMT1 的缺失不影响无性生殖和有性生殖 | 第45页 |
| ·amt1 缺失突变体生长受过氧化氢抑制 | 第45页 |
| ·amt1 缺失突变体对小麦和玉米的致病力下降 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 AMT1 基因功能回复验证 | 第48-54页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| ·试验方法 | 第49-52页 |
| ·互补引物的设计 | 第49-51页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第51页 |
| ·载体pHZ100 和PCR 产物的双酶切和连接 | 第51页 |
| ·连接产物的转化及互补载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·互补载体转化PH-1 及互补转化子的筛选 | 第52页 |
| ·互补转化子功能回复鉴定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-53页 |
| ·互补载体的构建 | 第52-53页 |
| ·互补转化子的获得 | 第53页 |
| ·AMT1 基因使amt1 缺失突变体表型和致病力恢复 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 AMT1 基因编码蛋白的表达和亚细胞定位 | 第54-62页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-59页 |
| ·亚细胞定位引物设计 | 第55-57页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第57-58页 |
| ·亚细胞定位载体的转化及转化子的筛选 | 第58页 |
| ·荧光显微镜下观察Amt1-GFP 表达和亚细胞定位 | 第58页 |
| ·AMT1 基因转录水平分析 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-60页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第59页 |
| ·亚细胞定位转化子的获得以及Amt1p 的表达和亚细胞定位 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第七章 AMT1 基因的缺失对fgHrp1p 和fgNa62p 转运的影响 | 第62-65页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第62页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·仪器 | 第62页 |
| ·试验方法 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-64页 |
| ·fgHRP1-GFP 和fgNA82-GFP 融合载体的构建、转化以及转化子的筛选 | 第62-63页 |
| ·fgHrp1-GFP 和fgNa62-GFP 融合蛋白的表达和亚细胞定位 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第八章 amt1 缺失突变体中致病相关因子转录水平的检测 | 第65-70页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·仪器 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-68页 |
| ·RNA 提取前的准备 | 第65页 |
| ·RNA 提取 | 第65-66页 |
| ·RNA 纯化 | 第66-67页 |
| ·cDNA 的制备 | 第67页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第九章 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
