| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及注解 | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-16页 |
| 1.1 研究背景 | 第9页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9在基因组编辑中的应用 | 第9-13页 |
| 1.2.1 可编辑的核酸酶的发展 | 第9-10页 |
| 1.2.2 CRISPR/CAS系统介绍 | 第10-12页 |
| 1.2.3 CRISPR/CAS9基因编辑系统 | 第12-13页 |
| 1.3 果蝇传统的基因敲入技术 | 第13-15页 |
| 1.3.1 利用IMAGO系统实现KI | 第13-14页 |
| 1.3.2 利用MiMIC系统实现果蝇KI | 第14-15页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第15页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要果蝇品系 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-31页 |
| 2.2.1 分子载体构建 | 第20-23页 |
| 2.2.2 基本果蝇管理 | 第23-24页 |
| 2.2.3 质粒中提 | 第24-25页 |
| 2.2.4 果蝇显微注射 | 第25-28页 |
| 2.2.5 果蝇基因组DNA粗提方法 | 第28页 |
| 2.2.6 果蝇成虫盘免疫染色 | 第28页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第28-30页 |
| 2.2.8 T7EN1酶切分析 | 第30-31页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第31-52页 |
| 3.1 在PINK1 3'UTR区域实现基因敲入 | 第31-35页 |
| 3.1.1 PINK1-mCherry-Flag等位基因敲入策略 | 第31-32页 |
| 3.1.2 PINK1-mCherry-Flag等位基因敲入果蝇的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.3 PINK1-mCherry-Flag等位基因敲入果蝇的功能验证 | 第33-35页 |
| 3.2 在Dpp外显子区域实现基因敲入 | 第35-40页 |
| 3.2.1 Dpp-Dendra-V5等位基因敲入策略 | 第35-36页 |
| 3.2.2 Dpp-Dendra-V5等位基因敲入果蝇的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 Dpp-Dendra-V5等位基因敲入果蝇的功能验证 | 第37-40页 |
| 3.3 在Hedgehog的内含子区域实现基因敲入 | 第40-46页 |
| 3.3.1 Hh-in-Dendra-V5-3p3DsRed等位基因敲入策略 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Hh-in-Dendra-V5-3p3-Ds-Red等位基因敲入果蝇的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 Hh-in-Dendra-V5-3p3-DsRed等位基因敲入果蝇的功能验证 | 第42-44页 |
| 3.3.4 Hh-in-yellow等位基因敲入 | 第44-46页 |
| 3.4 Cas9转基因效率分析 | 第46-47页 |
| 3.5 Cas9脱靶效应分析 | 第47-49页 |
| 3.6 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 个人简历 | 第58页 |
