摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
1 引言 | 第15-17页 |
2 材料 | 第17-25页 |
2.1 使用的主要试剂 | 第17-19页 |
2.1.1 细胞培养相关试剂 | 第17页 |
2.1.2 蛋白和RNA相关试剂 | 第17-18页 |
2.1.3 相关抗体 | 第18-19页 |
2.2 主要仪器设备 | 第19-20页 |
2.3 主要溶剂的配制和方法 | 第20-25页 |
3 方法 | 第25-35页 |
3.1 免疫荧光实验(鉴定DC2.4 细胞) | 第25页 |
3.2 引物设计 | 第25-26页 |
3.3 Ecoli DH5α 感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
3.4 转化 | 第27页 |
3.5 挑取阳性克隆 | 第27-28页 |
3.6 PCMV-C-Flag及所用质粒的提取 | 第28页 |
3.7 质粒的验证 | 第28页 |
3.8 DC2.4 细胞培养与转染 | 第28-29页 |
3.9 DC2.4 细胞m RNA的提取及反转录 | 第29-30页 |
3.10 RT-PCR | 第30-31页 |
3.11 DC2.4 细胞蛋白质的提取和浓度测定(BCA法) | 第31页 |
3.12 免疫印迹杂交法 | 第31-33页 |
3.13 流式细胞术对DC2.4 细胞膜表面表达分子及表面共刺激的分子的检测(直接标记法) | 第33页 |
3.14 DC2.4 细胞划痕实验 | 第33页 |
3.15 DC2.4 细胞小室实验 | 第33-34页 |
3.16 DC2.4 细胞平板克隆实验 | 第34页 |
3.17 统计学分析 | 第34-35页 |
4 结果 | 第35-51页 |
4.1 DC2.4 细胞鉴定 | 第35-37页 |
4.2 PCNP片断和CDS区全长 | 第37-38页 |
4.3 成功建立PCNP过表达及沉默稳定株(RT-PCR验证) | 第38页 |
4.4 成功构建PCNP过表达及沉默稳定株(Western Blot验证) | 第38-40页 |
4.5 PCNP过表达与沉默对DC2.4 细胞形态的影响 | 第40-41页 |
4.6 PCNP 过表达与沉默对 DC 表面分子 MHCII 及表面共刺激分子CD80、CD86 的影响 | 第41-42页 |
4.7 PCNP过表达与沉默对DC细胞迁移的影响(细胞划痕实验) | 第42-43页 |
4.8 PCNP过表达与沉默对DC细胞迁移的影响(T实验) | 第43-44页 |
4.9 PCNP过表达与沉默对DC细胞克隆形成能力的影响(平板克隆实验) | 第44-45页 |
4.10 分别用LPS和MG-132 处理DC2.4 细胞的PCNP基因沉默和过表达稳定株,检测处理后DC2.4 细胞形态的变化 | 第45-46页 |
4.11 PCNP沉默和过表达后的DC2.4 细胞再分别用LPS和MG-132 处理,检测对DC细胞迁移的影响 | 第46-47页 |
4.12 DC2.4 细胞经PCNP沉默和过表达后分别用LPS和MG-132 处理,观察对DC细胞克隆形成能力的影响 | 第47-49页 |
4.13 PCNP 沉默和过表达后再分别用 LPS 和 MG-132 处理对 DC2.4细胞 TNF-α 表达的影响 | 第49-51页 |
小结 | 第51-53页 |
讨论 | 第53-59页 |
结论 | 第59-61页 |
参考文献 | 第61-65页 |
综述 | 第65-87页 |
参考文献 | 第82-87页 |
致谢 | 第87-89页 |
在读期间参加的学术会议及研究成果 | 第89-90页 |