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突变p53蛋白p53N236S在DFO模拟的缺氧应激反应中的作用及相关机制初探

摘要第6-9页
Abstract第9-12页
缩略词第16-17页
第一章 绪论第17-31页
    1.1 野生型p53及其研究进展第17-19页
        1.1.1 野生型p53的结构第17-18页
        1.1.2 野生型p53的功能第18-19页
    1.2 突变型p53概述第19-22页
        1.2.1 突变p53的类型与功能第19-21页
        1.2.2 突变p53的演变过程第21-22页
            1.2.2.1 早期阶段突变p53的负显性抑制功能第21页
            1.2.2.2 杂合性缺失后的突变p53成瘾现象第21-22页
        1.2.3 突变p53的未来第22页
    1.3 DFO概述第22-24页
        1.3.1 DFO简介与功能第22-23页
        1.3.2 DFO在临床及基础研究中的应用第23-24页
    1.4 缺氧应激反应的调控第24-26页
        1.4.1 缺氧应激反应第24页
        1.4.2 p53与缺氧诱导因子-1(HIF-1)第24-25页
        1.4.3 缺氧诱导因子-1(HIF-1)与活性氧(ROS)第25-26页
        1.4.4 DFO与缺氧诱导因子-1(HIF-1)第26页
    1.5 p53介导的细胞凋亡与自噬第26-30页
        1.5.1 p53参与缺氧条件下细胞凋亡的调控第27-28页
        1.5.2 p53与细胞自噬第28-29页
        1.5.3 细胞自噬与细胞凋亡的相互关系第29-30页
    1.6 本研究的主要内容及意义第30-31页
第二章 在DFO模拟的缺氧微环境中p53~(N236S)调控细胞发生自噬第31-58页
    2.1 材料与方法第31-45页
        2.1.1 p53S小鼠基因型的鉴定第31-34页
            2.1.1.1 小鼠尾巴DNA的提取第31-32页
            2.1.1.2 小鼠p53S基因型鉴定第32-34页
        2.1.2 小鼠MEF细胞的制作第34-35页
        2.1.3 细胞培养第35-36页
            2.1.3.1 细胞复苏第35-36页
            2.1.3.2 细胞传代第36页
            2.1.3.3 细胞冻存第36页
            2.1.3.4 细胞收集第36页
        2.1.4 DFO处理细胞第36-37页
        2.1.5 Western blot实验第37-40页
            2.1.5.1 蛋白提取第37-38页
            2.1.5.2 考马斯亮蓝法蛋白定量第38页
            2.1.5.3 聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)第38-40页
        2.1.6 流式细胞仪检测细胞凋亡第40-41页
        2.1.7 透射电子显微镜检测第41页
        2.1.8 免疫荧光实验第41-43页
        2.1.9 吖啶橙染色第43页
        2.1.10 MDC染色实验第43-45页
    2.2 实验主要仪器第45-46页
    2.3 结果与分析第46-55页
        2.3.1 p53S仍具有调控缺氧应激相关蛋白的功能第47页
        2.3.2 DFO模拟的缺氧微环境诱导细胞发生凋亡第47-49页
        2.3.3 p53S突变致使细胞具有抗凋亡作用第49-50页
        2.3.4 DFO模拟的缺氧微环境诱导p53S细胞发生自噬第50-53页
        2.3.5 DFO模拟的缺氧微环境诱导p53S蛋白发生转位增强自噬第53-55页
    2.4 讨论第55-58页
第三章 在DFO模拟的缺氧微环境中p53~(N236S)调控细胞发生的自噬对凋亡的影响第58-75页
    3.1 材料与方法第58-63页
        3.1.1 细胞培养第58-59页
            3.1.1.1 细胞复苏第58页
            3.1.1.2 细胞传代第58-59页
            3.1.1.3 细胞冻存第59页
            3.1.1.4 细胞收集第59页
        3.1.2 Western blot实验第59页
        3.1.3 流式细胞仪检测细胞凋亡第59-60页
        3.1.4 免疫荧光实验第60页
        3.1.5 流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位第60-61页
        3.1.6 流式细胞仪检测细胞ROS实验第61-63页
    3.2 实验主要仪器第63-64页
    3.3 结果与分析第64-72页
        3.3.1 p53~(N236S)诱导的自噬抑制细胞凋亡的发生第64-66页
        3.3.2 p53~(N236S)通过线粒体内源途径在缺氧应激反应中调控细胞发生凋亡第66-67页
        3.3.3 p53~(N236S)在DFO诱导的缺氧应激反应中调控细胞发生自噬属于p53功能获得第67-70页
        3.3.4 p53~(N236S)通过调控自噬清除受损的线粒体抑制凋亡的发生第70-72页
    3.4 讨论第72-75页
第四章 总结与展望第75-77页
致谢第77-78页
参考文献第78-86页
附录 攻读硕士期间发表论文目录第86页

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