摘要 | 第6-9页 |
Abstract | 第9-12页 |
缩略词 | 第16-17页 |
第一章 绪论 | 第17-31页 |
1.1 野生型p53及其研究进展 | 第17-19页 |
1.1.1 野生型p53的结构 | 第17-18页 |
1.1.2 野生型p53的功能 | 第18-19页 |
1.2 突变型p53概述 | 第19-22页 |
1.2.1 突变p53的类型与功能 | 第19-21页 |
1.2.2 突变p53的演变过程 | 第21-22页 |
1.2.2.1 早期阶段突变p53的负显性抑制功能 | 第21页 |
1.2.2.2 杂合性缺失后的突变p53成瘾现象 | 第21-22页 |
1.2.3 突变p53的未来 | 第22页 |
1.3 DFO概述 | 第22-24页 |
1.3.1 DFO简介与功能 | 第22-23页 |
1.3.2 DFO在临床及基础研究中的应用 | 第23-24页 |
1.4 缺氧应激反应的调控 | 第24-26页 |
1.4.1 缺氧应激反应 | 第24页 |
1.4.2 p53与缺氧诱导因子-1(HIF-1) | 第24-25页 |
1.4.3 缺氧诱导因子-1(HIF-1)与活性氧(ROS) | 第25-26页 |
1.4.4 DFO与缺氧诱导因子-1(HIF-1) | 第26页 |
1.5 p53介导的细胞凋亡与自噬 | 第26-30页 |
1.5.1 p53参与缺氧条件下细胞凋亡的调控 | 第27-28页 |
1.5.2 p53与细胞自噬 | 第28-29页 |
1.5.3 细胞自噬与细胞凋亡的相互关系 | 第29-30页 |
1.6 本研究的主要内容及意义 | 第30-31页 |
第二章 在DFO模拟的缺氧微环境中p53~(N236S)调控细胞发生自噬 | 第31-58页 |
2.1 材料与方法 | 第31-45页 |
2.1.1 p53S小鼠基因型的鉴定 | 第31-34页 |
2.1.1.1 小鼠尾巴DNA的提取 | 第31-32页 |
2.1.1.2 小鼠p53S基因型鉴定 | 第32-34页 |
2.1.2 小鼠MEF细胞的制作 | 第34-35页 |
2.1.3 细胞培养 | 第35-36页 |
2.1.3.1 细胞复苏 | 第35-36页 |
2.1.3.2 细胞传代 | 第36页 |
2.1.3.3 细胞冻存 | 第36页 |
2.1.3.4 细胞收集 | 第36页 |
2.1.4 DFO处理细胞 | 第36-37页 |
2.1.5 Western blot实验 | 第37-40页 |
2.1.5.1 蛋白提取 | 第37-38页 |
2.1.5.2 考马斯亮蓝法蛋白定量 | 第38页 |
2.1.5.3 聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第38-40页 |
2.1.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第40-41页 |
2.1.7 透射电子显微镜检测 | 第41页 |
2.1.8 免疫荧光实验 | 第41-43页 |
2.1.9 吖啶橙染色 | 第43页 |
2.1.10 MDC染色实验 | 第43-45页 |
2.2 实验主要仪器 | 第45-46页 |
2.3 结果与分析 | 第46-55页 |
2.3.1 p53S仍具有调控缺氧应激相关蛋白的功能 | 第47页 |
2.3.2 DFO模拟的缺氧微环境诱导细胞发生凋亡 | 第47-49页 |
2.3.3 p53S突变致使细胞具有抗凋亡作用 | 第49-50页 |
2.3.4 DFO模拟的缺氧微环境诱导p53S细胞发生自噬 | 第50-53页 |
2.3.5 DFO模拟的缺氧微环境诱导p53S蛋白发生转位增强自噬 | 第53-55页 |
2.4 讨论 | 第55-58页 |
第三章 在DFO模拟的缺氧微环境中p53~(N236S)调控细胞发生的自噬对凋亡的影响 | 第58-75页 |
3.1 材料与方法 | 第58-63页 |
3.1.1 细胞培养 | 第58-59页 |
3.1.1.1 细胞复苏 | 第58页 |
3.1.1.2 细胞传代 | 第58-59页 |
3.1.1.3 细胞冻存 | 第59页 |
3.1.1.4 细胞收集 | 第59页 |
3.1.2 Western blot实验 | 第59页 |
3.1.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第59-60页 |
3.1.4 免疫荧光实验 | 第60页 |
3.1.5 流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位 | 第60-61页 |
3.1.6 流式细胞仪检测细胞ROS实验 | 第61-63页 |
3.2 实验主要仪器 | 第63-64页 |
3.3 结果与分析 | 第64-72页 |
3.3.1 p53~(N236S)诱导的自噬抑制细胞凋亡的发生 | 第64-66页 |
3.3.2 p53~(N236S)通过线粒体内源途径在缺氧应激反应中调控细胞发生凋亡 | 第66-67页 |
3.3.3 p53~(N236S)在DFO诱导的缺氧应激反应中调控细胞发生自噬属于p53功能获得 | 第67-70页 |
3.3.4 p53~(N236S)通过调控自噬清除受损的线粒体抑制凋亡的发生 | 第70-72页 |
3.4 讨论 | 第72-75页 |
第四章 总结与展望 | 第75-77页 |
致谢 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-86页 |
附录 攻读硕士期间发表论文目录 | 第86页 |