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rAAV2介导IGF-I基因联合间充质干细胞对骨骼肌钝挫伤小鼠修复作用的研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
序言第10-12页
文献综述第12-25页
    1.胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)概述第12-14页
        1.1 IGF-Ⅰ的生物学功能第13页
        1.2 IGF-Ⅰ对骨骼肌的作用第13-14页
    2.腺相关病毒概述第14-16页
    3.间充质干细胞概述第16-20页
        3.1 间充质干细胞的发现第16-17页
        3.2 MSC的临床应用前景第17-19页
        3.3 间充质干细胞治疗骨骼肌损伤第19-20页
    4 骨骼肌损伤概述第20-25页
        4.1 骨骼肌损伤的分类第20-21页
        4.2 急性骨骼肌损伤的造模方法第21-22页
        4.3 骨骼肌损伤的治疗方法第22-25页
1 材料与方法第25-42页
    1.1 实验动物与分组第25页
    1.2 小鼠腓肠肌急性钝挫伤模型的建立第25页
    1.3 携带人IGF-Ⅰ基因的重组腺相关病毒载体(rAAV2-IGF-Ⅰ)包装及鉴定第25-35页
        1.3.1 pTR-iRFP713-IRES-IGF-Ⅰ质粒构建第25-31页
        1.3.2 pAAV-iRFP713-IRES-IGF-Ⅰ、PDG质粒的大量制备第31页
        1.3.3 rAAV2-IGF-Ⅰ病毒包装第31-32页
        1.3.4 rAAV2-IGF-Ⅰ的分离和纯化第32-33页
        1.3.5 rAAV2-IGF-Ⅰ滴度测定第33-34页
        1.3.6 重组病毒鉴定第34-35页
    1.4 小鼠肌肉注射细胞、病毒第35-36页
    1.5 取材与指标检测第36-40页
        1.5.1 血液、肌肉取材第36页
        1.5.2 HE染色第36页
        1.5.3 IGF-Ⅰ 免疫组化及图像分析第36-37页
        1.5.4 小鼠腓肠肌Collagen-ⅠmRNA、Collagen-Ⅲ mRNA含量测定第37-39页
        1.5.5 小鼠血清肌酸激酶(CK)酶联免疫分析第39-40页
    1.6 主要实验仪器和试剂第40-41页
        1.6.1 实验主要仪器第40-41页
    1.7 数据统计处理第41-42页
2 实验结果第42-56页
    2.1 RAAV2 –IGF-Ⅰ病毒包装结果及其在细胞内IRFP713报告基因的表达第42-47页
        2.1.1 pTR-EGFP-IRES-IGF-Ⅰ质粒鉴定结果第42页
        2.1.2 pTR-iRFP713-IRES-IGF-Ⅰ质粒鉴定结果第42-43页
        2.1.3 pAAV-IRFP713-IRES-IGF-Ⅰ质粒鉴定结果第43-44页
        2.1.4 rAAV2-IGF-Ⅰ腺相关病毒包装、鉴定及病毒滴度测定第44-46页
        2.1.5 rAAV2 –IGF-Ⅰ腺相关病毒感染细胞及功能基因IGF-Ⅰwestern-blot鉴定第46-47页
    2.2 肌肉注射rAAV2-IGF-Ⅰ、rAAV2-IGF-Ⅰ-MSC后iRFP报告基因表达比较第47页
    2.3 各组小鼠肌肉组织HE染色光镜结果观察比较第47-50页
    2.4 各组小鼠肌肉组织IGF-Ⅰ免疫组化结果比较第50-52页
    2.5 不同治疗方法对急性骨骼肌钝挫伤小鼠腓肠肌Collagen-Ⅰ、Ⅲ mRNA表达的影响第52-54页
    2.6 不同治疗方法对急性骨骼肌钝挫伤小鼠血清CK含量的影响第54-56页
3 分析与讨论第56-61页
    3.1 腺相关病毒作为骨骼肌损伤基因治疗表达载体的可行性第56页
    3.2 骨骼肌急性损伤后各组别的自然愈合过程第56-57页
    3.3 骨骼肌损伤后各组别Collagen-Ⅰ、Ⅲ mRNA的表达第57-59页
    3.4 骨骼肌损伤后各组别血清CK浓度变化第59-61页
4 结论第61-62页
参考文献第62-69页
攻读硕士期间公开发表的论文第69-70页
致谢第70-71页

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