| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 哺乳动物精卵融合机制研究进展 | 第10-17页 |
| 1.1 精子发生和形态改变 | 第10-11页 |
| 1.2 精子的成熟与获能 | 第11-12页 |
| 1.3 顶体反应 | 第12-13页 |
| 1.4 膜融合过程 | 第13-14页 |
| 1.5 睾丸特异性蛋白 | 第14-16页 |
| 1.5.1 睾丸特异性丝氨酸激酶TSSK | 第14页 |
| 1.5.2 免疫球蛋白超家族IZUMO | 第14-15页 |
| 1.5.3 富含半胱氨酸分泌蛋白家族 | 第15-16页 |
| 1.5.4 精子赤道区蛋白1(SPESP1) | 第16页 |
| 1.5.5 ADAMS | 第16页 |
| 1.6 小结 | 第16-17页 |
| 第二章 研究论文 | 第17-58页 |
| 2.1 引言 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第18-37页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.2.1.1 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.1.2 主要实验仪器设备 | 第19页 |
| 2.2.1.3 常用溶液配制 | 第19-22页 |
| 2.2.1.4 实验菌株、动物和载体 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第23-37页 |
| 2.2.2.1 绵羊睾丸组织总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 绵羊睾丸组织cDNA的合成和检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2.2.1 绵羊睾丸组织cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2.2.2 cDNA产物检测 | 第25页 |
| 2.2.2.3 绵羊Tssk6、Izumo1、Izumo4的c DNA全长的克隆 | 第25-28页 |
| 2.2.2.3.0 克隆引物的设计 | 第25-27页 |
| 2.2.2.3.1 绵羊Tssk6、Izumo1、Izumo4的c DNA的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3.2 克隆载体的构建与鉴定 | 第28页 |
| 2.2.2.4 pGEX-Tssk6、pGEX-Izumo1、p GEX-Izumo4 原核表达及鉴定 | 第28-32页 |
| 2.2.2.4.1 Tssk6、Izumo1、Izumo4 原核表达载体引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4.2 Tssk6、Izumo1、Izumo4 原核表达片段的克隆及过渡载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.2.4.3 pGEX-Tssk6、pGEX-Izumo1、pGEX-Izumo4 载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2.4.4 pGEX-Tssk6、pGEX-Izumo1、pGEX-Izumo4 的原核表达 | 第31页 |
| 2.2.2.4.5 GST-TSSK6、GST-IZUMO1、GST-IZUMO4 融合蛋白的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第31页 |
| 2.2.2.4.6 GST-TSSK6、GST-IZUMO1、GST-IZUMO4 融合蛋白的Western blot鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5 GST-TSSK6、GST-IZUMO1及GST-IZUMO4 的纯化 | 第32页 |
| 2.2.2.6 Bradford法测定纯化后蛋白质浓度 | 第32-33页 |
| 2.2.2.7 S180细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2.8 兔抗羊TSSK6、鼠抗羊IZUMO1 和鼠抗羊IZUMO4 多克隆抗血清的制备及检测 | 第34-35页 |
| 2.2.2.8.1 兔抗羊TSSK6、鼠抗羊IZUMO1 和鼠抗羊IZUMO4 多克隆抗血清的制备 | 第34页 |
| 2.2.2.8.2 兔抗羊TSSK6 与鼠抗IZUMO1、鼠抗IZUMO4 抗体的特异性识别检测 | 第34-35页 |
| 2.2.2.8.3 Western blot检测腹水多克隆抗体和抗血清及组织蛋白 | 第35页 |
| 2.2.2.9 兔抗羊TSSK6、小鼠抗羊IZUMO1和IZUMO4 多克隆抗血清的纯化 | 第35页 |
| 2.2.2.10 间接免疫荧光检测TSSK6、IZUMO1和IZUMO4 的亚细胞定位 | 第35-37页 |
| 2.2.2.10.1 绵羊精子的处理 | 第35页 |
| 2.2.2.10.2 TSSK6与IZUMO1及IZUMO4 在精子表面上的共定位 | 第35-37页 |
| 2.3 结果 | 第37-55页 |
| 2.3.1 绵羊睾丸组织cDNA的质量检测 | 第37页 |
| 2.3.2 绵羊Tssk6、Izumo1、Izumo4的cDNA克隆 | 第37-38页 |
| 2.3.3 pMD-Tssk6、pMD-Izumo1、pMD-Izumo4 的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.4 pMD-Tssk6、pMD-Izumo1、pMD-Izumo4 测序结果分析 | 第39-42页 |
| 2.3.5 pGEX-Tssk6、pGEX-Izumo1、pGEX-Izumo4 原核表达载体双酶切鉴定 | 第42页 |
| 2.3.6 GST-TSSK6、GST-IZUMO1和GST-IZUMO4的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3.7 GST-TSSK6、GST-IZUMO1、GST-IZUMO4 融合蛋白的Western blot鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.8 GST-TSSK6、GST-IZUMO1、GST-IZUMO4 融合蛋白的纯化与浓度测定 | 第44-45页 |
| 2.3.9 Western blot检测纯化后的抗血清和腹水多克隆抗体 | 第45-48页 |
| 2.3.10 TSSK6、IZUMO1和IZUMO4 在顶体反应前精子中的定位 | 第48-50页 |
| 2.3.10.1 TSSK6、IZUMO1和IZUMO4 在顶体反应前精子中的定位 | 第48-50页 |
| 2.3.11 TSSK6、IZUMO1和IZUMO4 在顶体反应后精子中的定位 | 第50-52页 |
| 2.3.11.1 TSSK6、IZUMO1和IZUMO4 在顶体反应后精子中的定位 | 第50-52页 |
| 2.3.12 TSSK6与IZUMO1 在获能精子中的共定位 | 第52-53页 |
| 2.3.13 TSSK6与IZUMO4 在获能精子中的共定位 | 第53-55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-57页 |
| 2.4.1 Izumo1的cDNA克隆及选择性剪切分析 | 第55-56页 |
| 2.4.2 绵羊TSSK6与IZUMO1和IZUMO4 相互作用分析 | 第56-57页 |
| 2.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间参与的科研项目和发表论文 | 第63页 |
