| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-59页 |
| 1.1 生物碱概述 | 第18-23页 |
| 1.1.1 生物碱的发现历史 | 第19-20页 |
| 1.1.2 生物碱的命名 | 第20-21页 |
| 1.1.3 生物碱分类 | 第21-23页 |
| 1.2 咔唑生物碱研究进展 | 第23-35页 |
| 1.2.1 咔唑生物碱的发现与分类 | 第23-24页 |
| 1.2.2 植物来源3-甲基咔唑衍生物的生物合成 | 第24-28页 |
| 1.2.3 三环咔唑生物碱 | 第28-35页 |
| 1.3 异戊烯转移酶研究进展 | 第35-40页 |
| 1.3.1 异戊烯转移酶的分类 | 第35页 |
| 1.3.2 蛋白异戊烯转移酶简介 | 第35-36页 |
| 1.3.3 异戊烯焦磷酸合酶研究进展 | 第36-39页 |
| 1.3.4 萜环化酶简介 | 第39-40页 |
| 1.4 微生物来源的芳香异戊烯基转移酶研究进展 | 第40-55页 |
| 1.4.1 膜结合型芳香类异戊烯基转移酶 | 第40-41页 |
| 1.4.2 ABBA型异戊烯基转移酶 | 第41-42页 |
| 1.4.3 吲哚异戊烯基转移酶 | 第42-55页 |
| 1.5 天然产物的基因组挖掘研究 | 第55-57页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第57-59页 |
| 1.6.1 本研究的目的 | 第57页 |
| 1.6.2 本研究的意义 | 第57-59页 |
| 第二章 实验方材料与方法 | 第59-76页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-68页 |
| 2.1.1 菌株 | 第59-60页 |
| 2.1.2 质粒 | 第60-61页 |
| 2.1.3 引物 | 第61-66页 |
| 2.1.4 培养基和溶液 | 第66-68页 |
| 2.2 实验方法 | 第68-76页 |
| 2.2.1 DNA的提取、操作、引物合成及测序 | 第68页 |
| 2.2.2 链霉菌的培养及菌种保藏 | 第68页 |
| 2.2.3 链霉菌属间接合转移 | 第68-69页 |
| 2.2.4 PCR扩增体系及反应条件 | 第69-70页 |
| 2.2.5 In-fusion克隆技术(CLONTECH) | 第70页 |
| 2.2.6 MA37插入失活菌株的构建 | 第70页 |
| 2.2.7 MA37基因组文库的构建与PCR扫描 | 第70-71页 |
| 2.2.8 黏粒的异源表达 | 第71页 |
| 2.2.9 MA37同框缺失菌株的获得及突变株的回补 | 第71-72页 |
| 2.2.10 化合物的检测方法 | 第72-73页 |
| 2.2.11 中间体化合物的分离纯化方法 | 第73-74页 |
| 2.2.12 蛋白的超量表达与纯化 | 第74-76页 |
| 第三章 Neocarazostatin A的分离纯化与结构鉴定 | 第76-80页 |
| 3.1 引言 | 第76页 |
| 3.2 结果与分析 | 第76-79页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第79-80页 |
| 第四章 Neocarazostatin A生物合成基因簇的确定 | 第80-99页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 结果与分析 | 第80-97页 |
| 4.2.1 Neocarazostatin A的生物合成基因组的挖掘 | 第80-82页 |
| 4.2.2 Neocarazostatin A的生物合成基因簇的分析 | 第82-88页 |
| 4.2.3 Neocarazostatin A生物合成基因簇的验证 | 第88-90页 |
| 4.2.4 Neocarazostatin A生物合成基因簇的克隆 | 第90-91页 |
| 4.2.5 Neocarazostatin A生物合成基因簇的边界确定 | 第91-97页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第97-99页 |
| 第五章 Neocarazostatin A生物合成途径中异戊烯转移酶的功能研究 | 第99-120页 |
| 5.1 前言 | 第99页 |
| 5.2 结果分析 | 第99-118页 |
| 5.2.1 异戊烯转移酶的生物信息学研究 | 第99-101页 |
| 5.2.2 异戊烯转移酶的体内功能确定 | 第101-104页 |
| 5.2.3 异戊烯转移酶的表达与纯化 | 第104-105页 |
| 5.2.4 异戊烯转移酶的活性的初步探索 | 第105-108页 |
| 5.2.5 异戊烯转移酶敲除菌株的中间产物的分离与结构鉴定 | 第108-111页 |
| 5.2.6 异戊烯转移酶的底物特异性研究 | 第111-115页 |
| 5.2.7 异戊烯转移酶的酶学特征研究 | 第115-118页 |
| 5.3 小结讨论 | 第118-120页 |
| 第六章 Neocarazostatin A生物合成途径中羟化酶的功能研究 | 第120-132页 |
| 6.1 前言 | 第120页 |
| 6.2 结果与分析 | 第120-131页 |
| 6.2.1 羟化酶的敲除菌株的中间体的分离纯化与结构鉴定 | 第120-125页 |
| 6.2.2 羟化酶的超量表达和纯化 | 第125-126页 |
| 6.2.3 羟化酶的体外活性研究 | 第126-128页 |
| 6.2.4 羟化酶和异戊烯基转移酶的作用时序的确定 | 第128-131页 |
| 6.3 小结与讨论 | 第131-132页 |
| 第七章 Neocarazostatin A生物合成途径的初步探索 | 第132-148页 |
| 7.1 前言 | 第132页 |
| 7.2 结果与分析 | 第132-146页 |
| 7.2.1 Neocarazostatin A的生物合成途径的推导 | 第132-133页 |
| 7.2.2 Neocarazostatin A生物合成前体供应相关基因的缺失突变研究 | 第133-143页 |
| 7.2.3 Neocarazostatin A生物合成途径中骨架装配相关基因的缺失突变研究 | 第143-146页 |
| 7.3 小结与讨论 | 第146-148页 |
| 第八章 总结与展望 | 第148-150页 |
| 8.1 本研究工作总结 | 第148-149页 |
| 8.2 本研究工作展望 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-164页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第164-165页 |
| 致谢 | 第165-167页 |
| 附录 | 第167-172页 |
