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三环咔唑生物碱neocarazostatin A生物合成中新型级联修饰反应的研究

摘要第13-15页
Abstract第15-17页
第一章 文献综述第18-59页
    1.1 生物碱概述第18-23页
        1.1.1 生物碱的发现历史第19-20页
        1.1.2 生物碱的命名第20-21页
        1.1.3 生物碱分类第21-23页
    1.2 咔唑生物碱研究进展第23-35页
        1.2.1 咔唑生物碱的发现与分类第23-24页
        1.2.2 植物来源3-甲基咔唑衍生物的生物合成第24-28页
        1.2.3 三环咔唑生物碱第28-35页
    1.3 异戊烯转移酶研究进展第35-40页
        1.3.1 异戊烯转移酶的分类第35页
        1.3.2 蛋白异戊烯转移酶简介第35-36页
        1.3.3 异戊烯焦磷酸合酶研究进展第36-39页
        1.3.4 萜环化酶简介第39-40页
    1.4 微生物来源的芳香异戊烯基转移酶研究进展第40-55页
        1.4.1 膜结合型芳香类异戊烯基转移酶第40-41页
        1.4.2 ABBA型异戊烯基转移酶第41-42页
        1.4.3 吲哚异戊烯基转移酶第42-55页
    1.5 天然产物的基因组挖掘研究第55-57页
    1.6 本研究的目的和意义第57-59页
        1.6.1 本研究的目的第57页
        1.6.2 本研究的意义第57-59页
第二章 实验方材料与方法第59-76页
    2.1 实验材料第59-68页
        2.1.1 菌株第59-60页
        2.1.2 质粒第60-61页
        2.1.3 引物第61-66页
        2.1.4 培养基和溶液第66-68页
    2.2 实验方法第68-76页
        2.2.1 DNA的提取、操作、引物合成及测序第68页
        2.2.2 链霉菌的培养及菌种保藏第68页
        2.2.3 链霉菌属间接合转移第68-69页
        2.2.4 PCR扩增体系及反应条件第69-70页
        2.2.5 In-fusion克隆技术(CLONTECH)第70页
        2.2.6 MA37插入失活菌株的构建第70页
        2.2.7 MA37基因组文库的构建与PCR扫描第70-71页
        2.2.8 黏粒的异源表达第71页
        2.2.9 MA37同框缺失菌株的获得及突变株的回补第71-72页
        2.2.10 化合物的检测方法第72-73页
        2.2.11 中间体化合物的分离纯化方法第73-74页
        2.2.12 蛋白的超量表达与纯化第74-76页
第三章 Neocarazostatin A的分离纯化与结构鉴定第76-80页
    3.1 引言第76页
    3.2 结果与分析第76-79页
    3.3 小结与讨论第79-80页
第四章 Neocarazostatin A生物合成基因簇的确定第80-99页
    4.1 引言第80页
    4.2 结果与分析第80-97页
        4.2.1 Neocarazostatin A的生物合成基因组的挖掘第80-82页
        4.2.2 Neocarazostatin A的生物合成基因簇的分析第82-88页
        4.2.3 Neocarazostatin A生物合成基因簇的验证第88-90页
        4.2.4 Neocarazostatin A生物合成基因簇的克隆第90-91页
        4.2.5 Neocarazostatin A生物合成基因簇的边界确定第91-97页
    4.3 小结与讨论第97-99页
第五章 Neocarazostatin A生物合成途径中异戊烯转移酶的功能研究第99-120页
    5.1 前言第99页
    5.2 结果分析第99-118页
        5.2.1 异戊烯转移酶的生物信息学研究第99-101页
        5.2.2 异戊烯转移酶的体内功能确定第101-104页
        5.2.3 异戊烯转移酶的表达与纯化第104-105页
        5.2.4 异戊烯转移酶的活性的初步探索第105-108页
        5.2.5 异戊烯转移酶敲除菌株的中间产物的分离与结构鉴定第108-111页
        5.2.6 异戊烯转移酶的底物特异性研究第111-115页
        5.2.7 异戊烯转移酶的酶学特征研究第115-118页
    5.3 小结讨论第118-120页
第六章 Neocarazostatin A生物合成途径中羟化酶的功能研究第120-132页
    6.1 前言第120页
    6.2 结果与分析第120-131页
        6.2.1 羟化酶的敲除菌株的中间体的分离纯化与结构鉴定第120-125页
        6.2.2 羟化酶的超量表达和纯化第125-126页
        6.2.3 羟化酶的体外活性研究第126-128页
        6.2.4 羟化酶和异戊烯基转移酶的作用时序的确定第128-131页
    6.3 小结与讨论第131-132页
第七章 Neocarazostatin A生物合成途径的初步探索第132-148页
    7.1 前言第132页
    7.2 结果与分析第132-146页
        7.2.1 Neocarazostatin A的生物合成途径的推导第132-133页
        7.2.2 Neocarazostatin A生物合成前体供应相关基因的缺失突变研究第133-143页
        7.2.3 Neocarazostatin A生物合成途径中骨架装配相关基因的缺失突变研究第143-146页
    7.3 小结与讨论第146-148页
第八章 总结与展望第148-150页
    8.1 本研究工作总结第148-149页
    8.2 本研究工作展望第149-150页
参考文献第150-164页
攻读博士期间的科研成果第164-165页
致谢第165-167页
附录第167-172页

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