| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 耐热蛋白的研究进展 | 第13-18页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1. 最耐热的蛋白的发现 | 第13-14页 |
| 2. 影响蛋白热稳定性的因素 | 第14-15页 |
| 3. 研究蛋白质耐热性的手段 | 第15-16页 |
| 4. 耐热蛋白的应用及展望 | 第16-18页 |
| 4.1 从嗜热菌寻找耐热蛋白 | 第16-17页 |
| 4.2 通过基因工程改造提高蛋白稳定性 | 第17页 |
| 4.3 添加保护剂提高蛋白稳定性 | 第17-18页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第18-20页 |
| 1. 研究目的和意义 | 第18页 |
| 2. 研究内容 | 第18-19页 |
| 3. 实验流程图 | 第19-20页 |
| 第三章 耐热蛋白的初步纯化及鉴定 | 第20-27页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-22页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第20-22页 |
| 2. 方法 | 第22-24页 |
| 2.1 蚕蛹总蛋白的提取 | 第22-23页 |
| 2.2 不同温度热处理 | 第23页 |
| 2.3 双向电泳(参照GE Healthcare双向电泳操作手册) | 第23页 |
| 2.4 取点脱色、酶解 | 第23-24页 |
| 2.5 MALDI-TOF质谱分析 | 第24页 |
| 3. 结果 | 第24-26页 |
| 3.1 蚕蛹中耐热蛋白的初步纯化 | 第24-25页 |
| 3.2 双向电泳 | 第25页 |
| 3.3 质谱鉴定 | 第25-26页 |
| 4. 讨论 | 第26-27页 |
| 第四章 生物信息学分析 | 第27-32页 |
| 1. 生物信息学工具 | 第27页 |
| 2. 方法 | 第27页 |
| 2.1 Serpin和SSP2的氨基酸序列的获得 | 第27页 |
| 2.2 Serpin和SSP2的氨基酸序列分析 | 第27页 |
| 3. 结果 | 第27-30页 |
| 3.1 Serpin的氨基酸序列 | 第27-28页 |
| 3.2 Serpin同源性分析 | 第28-29页 |
| 3.3 SSP2的氨基酸序列 | 第29页 |
| 3.4 SSP2的同源性比对 | 第29-30页 |
| 4. 讨论 | 第30-32页 |
| 第五章 Serpin的分离纯化及活性检测 | 第32-39页 |
| 1. 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 1.1 材料 | 第32页 |
| 1.2 试剂 | 第32页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第32-33页 |
| 2. 方法 | 第33-35页 |
| 2.1 蚕蛹耐热蛋白粗想 | 第33页 |
| 2.2 Serpin的粗提 | 第33页 |
| 2.3 Superdex~(TM) 200分离Serpin | 第33-34页 |
| 2.4 Gelatin活性染色 | 第34页 |
| 2.5 DSC测定Serpin变性温度 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-37页 |
| 3.1 Serpin的粗提 | 第35页 |
| 3.2 Superdex~(TM) 200 的分离Serpin | 第35-36页 |
| 3.3 Gelatin活性染色 | 第36-37页 |
| 3.5 DSC测定Serpin变性温度 | 第37页 |
| 4. 讨论 | 第37-39页 |
| 第六章 性别储存蛋白2(SSP2)的分离纯化 | 第39-53页 |
| 1. 材料与试剂 | 第39页 |
| 1.1 材料 | 第39页 |
| 1.2 试剂 | 第39页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第39页 |
| 2. 方法 | 第39-41页 |
| 2.1 SSP2的粗提 | 第39页 |
| 2.2 Superdex~(TM)200分离SSP2 | 第39-40页 |
| 2.3 Resource Q 纯化SSP2 | 第40页 |
| 2.4 非变性PAGE割胶回收 | 第40页 |
| 2.5 流式细胞仪检测SSP2对细胞影响 | 第40-41页 |
| 2.6 MTT法检测SSP2对细胞生长的影响 | 第41页 |
| 3. 结果 | 第41-51页 |
| 3.1 SSP2的分离纯化 | 第41-42页 |
| 3.2 质谱鉴定 | 第42-45页 |
| 3.3 SSP2的多聚体形式的验证 | 第45-47页 |
| 3.4 流式细胞仅检测SSP2对BmN细胞影响 | 第47-49页 |
| 3.5 MTT法检测SSP2对细胞的影响 | 第49-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 在学期间发表的论文 | 第59页 |
