| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 Lck的分子结构特点 | 第10-12页 |
| 1.1.1 N-末端膜定位结构域 | 第10-11页 |
| 1.1.2 独特(Unique)结构域 | 第11页 |
| 1.1.3 SH3和SH2结构域 | 第11页 |
| 1.1.4 酪氨酸激酶(催化)结构域 | 第11-12页 |
| 1.2 Lck的激活调节模型 | 第12-13页 |
| 1.3 Lek和Fyn的信号转导途径 | 第13-15页 |
| 1.4 Lek和Fyn对T细胞发育的作用 | 第15-20页 |
| 1.4.1 T细胞的发育过程 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Lck和Fyn在DN分化为DP过程中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4.3 Lck和Fyn在DP分化为SP过程中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4.4 由Lck或Fyn调节的TCR及细胞因子IL-7R协同介导的信号转导调节初始T细胞的存活和恒定增殖 | 第18-20页 |
| 1.5 Lek和Fyn对TCR信号转导的影响 | 第20-21页 |
| 1.6 Lck和Fyn在调节γδTCR信号强度中的作用 | 第21-22页 |
| 1.7 结语 | 第22-24页 |
| 2 七鳃鳗Lck-like的分子克隆 | 第24-45页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 药品及试剂 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.2 白细胞分离 | 第26页 |
| 2.2.3 白细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4 RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.5 cDNA5’末端全长快速扩增反应(5’RACE) | 第28-32页 |
| 2.2.6 cDNA3’末端全长快速扩增反应(3’RACE) | 第32-34页 |
| 2.2.7 目的片段的回收 | 第34页 |
| 2.2.8 目的片段与载体连接及转化 | 第34-35页 |
| 2.2.9 重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.10 重组质粒的提取及测序 | 第36-37页 |
| 2.2.11 小量感受态细胞制备方法 | 第37页 |
| 2.2.12 3’RACE实验和5’RACE实验所得的序列拼接 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-43页 |
| 2.3.1 白细胞总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.3.2 Lck-like全长扩增 | 第38-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-45页 |
| 3 Lck-like编码氨基酸序列生物信息学分析 | 第45-63页 |
| 3.1 分析所用的在线网站和软件 | 第45页 |
| 3.2 结果 | 第45-60页 |
| 3.2.1 一级结构分析 | 第45-49页 |
| 3.2.2 功能结构域预测 | 第49-50页 |
| 3.2.3 二级结构预测 | 第50-53页 |
| 3.2.4 三级结构模拟 | 第53页 |
| 3.2.5 抗原表位预测 | 第53-54页 |
| 3.2.6 同源序列比对 | 第54-56页 |
| 3.2.7 保守性分析 | 第56-59页 |
| 3.2.8 系统发育分析 | 第59-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 4 实时荧光定量PCR法检测七鳃鳗Lck-like在各组织中的相对表达量 | 第63-70页 |
| 4.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第63-64页 |
| 4.1.3 药品及试剂 | 第64页 |
| 4.2 方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 LPS刺激七鳃鳗 | 第64页 |
| 4.2.2 白细胞的分离及组织提取 | 第64页 |
| 4.2.3 白细胞及组织总RNA的提取 | 第64-65页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR法检测目的基因的相对表达量 | 第65-66页 |
| 4.3 结果 | 第66-68页 |
| 4.3.1 组织总RNA提取 | 第66-67页 |
| 4.3.2 Lck-like在七鳃鳗不同组织中的相对表达量 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 4.5 小结 | 第69-70页 |
| 5 重组Lck-like载体的构建及原核表达 | 第70-79页 |
| 5.1 材料 | 第70-71页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第70页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第70页 |
| 5.1.3 药品及试剂 | 第70-71页 |
| 5.2 方法 | 第71-75页 |
| 5.2.1 设计引物 | 第71页 |
| 5.2.2 PCR扩增 | 第71-72页 |
| 5.2.3 目的片段回收 | 第72页 |
| 5.2.4 目的片段与载体相连与转化 | 第72页 |
| 5.2.5 重组表达菌的鉴定 | 第72-73页 |
| 5.2.6 蛋白的诱导表达 | 第73页 |
| 5.2.7 SDS-PAGE鉴定 | 第73-74页 |
| 5.2.8 可溶性蛋白和包涵体的分离方法 | 第74-75页 |
| 5.3 结果 | 第75-77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-78页 |
| 5.5 小结 | 第78-79页 |
| 6 结论 | 第79-80页 |
| 本论文的创新点 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 附录A 血液cDNA文库中与Lck高度同源的序列 | 第87-88页 |
| 附录B 七鳃鳗Lck-like mRNA全序列 | 第88-90页 |
| 附录C 不同物种的Lck-like的FASTA格式氨基酸序列 | 第90-94页 |
| 研究生期间发表文章及研究成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
