| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 降钙素原生物化学特性 | 第15-17页 |
| 1.1.1 降钙素原的基因结构与氨基酸组成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 降钙素原的来源 | 第16-17页 |
| 1.1.3 细菌感染时变化机制 | 第17页 |
| 1.2 降钙素原的检测方法 | 第17-19页 |
| 1.3 降钙素原的临床应用 | 第19-23页 |
| 1.3.1 鉴别诊断细菌性与非细菌性炎性疾病 | 第19页 |
| 1.3.2 鉴别病原性细菌类型 | 第19-20页 |
| 1.3.3 脓毒症的早期鉴别诊断 | 第20页 |
| 1.3.4 尿路感染的定位分析 | 第20-21页 |
| 1.3.5 中枢神经系统感染中的应用 | 第21页 |
| 1.3.6 急性冠状动脉综合征临床应用 | 第21-22页 |
| 1.3.7 判断急性胰腺炎的预后 | 第22页 |
| 1.3.8 指导抗生素治疗 | 第22-23页 |
| 1.4 PCT的研究现状以及问题 | 第23-25页 |
| 第二章 人降钙素原原核表达重组载体的构建 | 第25-40页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第25页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.1.5 载体与菌株 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 查询PCT的基因序列和氨基酸组成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR技术扩增目的基因 | 第29-30页 |
| 2.2.4 PCR产物的回收 | 第30-31页 |
| 2.2.5 PCT/pTG19-T载体的构建与鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.6 PCT/pET-22b(+)原核表达载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3 结果 | 第35-38页 |
| 2.3.1 梯度PCR结果 | 第35页 |
| 2.3.2 PCR扩增目的基因 | 第35-36页 |
| 2.3.3 PCT/pTG19-T重组载体鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.4 PCT/pET-22b(+)重组表达载体鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 PCT重组蛋白表达、表达条件优化及纯化 | 第40-56页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第40-44页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第40页 |
| 3.1.2 实验耗材 | 第40页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第41-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 PCT蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第44-46页 |
| 3.2.2 PCT蛋白最佳诱导条件的优化 | 第46页 |
| 3.2.3 PCT蛋白大量表达 | 第46-47页 |
| 3.2.4 Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白 | 第47-48页 |
| 3.2.5 Ni~(2+)树脂再生 | 第48-49页 |
| 3.2.6 纯化蛋白的鉴定 | 第49页 |
| 3.3 结果 | 第49-55页 |
| 3.3.1 PCT重组蛋白的诱导表达与可溶性分析 | 第49-50页 |
| 3.3.2 PCT重组蛋白表达条件的优化 | 第50-53页 |
| 3.3.3 PCT蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 3.3.4 Western blotting和胶体金法鉴定纯化蛋白 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 PCT多克隆抗体的制备 | 第56-62页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 主要实验仪器 | 第56页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第56页 |
| 4.1.3 实验耗材 | 第56页 |
| 4.1.4 试剂及其配制 | 第56-57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 抗原准备及免疫 | 第57-58页 |
| 4.2.2 抗血清的收集 | 第58页 |
| 4.2.3 抗体效价测定 | 第58-59页 |
| 4.3 结果 | 第59-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 PCT在不同介质下的稳定性分析 | 第62-68页 |
| 5.1 实验仪器和材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 主要实验仪器 | 第62页 |
| 5.1.2 主要实验耗材 | 第62页 |
| 5.1.3 试剂及其配制 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 5.2.1 标本收集 | 第63页 |
| 5.2.2 标本的前处理与分组 | 第63页 |
| 5.2.3 数据的统计学处理 | 第63页 |
| 5.2.4 考马斯亮兰G-250 法检测PCT重组蛋白 | 第63-64页 |
| 5.2.5 PCT纯化蛋白在不同介质中稳定性分析 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-67页 |
| 5.3.1 25℃下血浆管和全血管PCT检测值变化分析 | 第64-65页 |
| 5.3.2 4℃下血浆管和全血管PCT检测值变化分析 | 第65-66页 |
| 5.3.3 PCT纯化蛋白在不同介质中的变化 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-68页 |
| 结论与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 读研期间发表论文、参加课题 | 第75页 |
