| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 细菌防治线虫的研究进展 | 第12-21页 |
| 1. 前言 | 第12-13页 |
| 2. 杀线虫细菌的侵染过程及杀线虫机理 | 第13-16页 |
| 2.1 杀线虫细菌侵染线虫的过程 | 第13-14页 |
| 2.2 寄生性细菌对植物寄生线虫的防治 | 第14页 |
| 2.3 根际细菌对植物寄生线虫的防治 | 第14-15页 |
| 2.4 苏云金芽孢杆菌对寄生线虫的防治 | 第15-16页 |
| 2.5 铜绿假单胞菌对病原线虫的防治 | 第16页 |
| 3. Bacillus nematocida B16的杀线虫过程 | 第16-18页 |
| 3.1 B16的表型特征以及生理生化特征 | 第16-17页 |
| 3.2 B16捕杀线虫的分子机制研究进展 | 第17页 |
| 3.3 蛋白乙酰化参与B16杀线虫的调控 | 第17-18页 |
| 4. 芽孢杆菌基因敲除方法和质粒的研究进展 | 第18-20页 |
| 4.1 利用同源重组进行基因敲除 | 第19页 |
| 4.2 利用随机插入突变进行基因敲除 | 第19-20页 |
| 5. 本研究的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 烟酰胺提高B16的杀线虫活性以及acuC基因的敲除 | 第21-32页 |
| 1. 前言 | 第21页 |
| 2. 材料和方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验用培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 主要的实验用生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要的实验仪器和设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 烟酰胺(NAM)影响B16毒杀C.elegans活性的检测 | 第23页 |
| 2.2.2 获取acuC片段 | 第23-26页 |
| 2.2.3 构建敲除载体 | 第26-28页 |
| 2.2.4 宿主菌B16感受态的制备与敲除载体的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 敲除验证 | 第29页 |
| 3. 实验结果 | 第29-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 通过接合转移提高B16的质粒转化效率 | 第32-41页 |
| 1. 前言 | 第32页 |
| 2. 材料和方法 | 第32-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.2 实验用培养基 | 第33页 |
| 2.1.3 主要的实验用生化试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要的实验仪器和设备 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.2.1 B16 Rif~+菌株的获得 | 第34页 |
| 2.2.2 测试接合转移效率的质粒pRK415-kan的构建 | 第34-38页 |
| 2.2.3 接合转移 | 第38页 |
| 2.2.4 接合转移转化子的筛选、验证 | 第38页 |
| 3. 实验结果 | 第38-40页 |
| 3.1 B16 Rif~+菌株的获得 | 第38-39页 |
| 3.2 质粒pRK415-kan的构建 | 第39页 |
| 3.3 pRK415-kan测试接合转移的效率 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 改造pCP115为结合转移质粒并构建acuC基因敲除载体 | 第41-50页 |
| 1. 前言 | 第41页 |
| 2. 材料与方法 | 第41-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第41-42页 |
| 2.1.2 实验用培养基 | 第42页 |
| 2.1.3 主要的实验用生化试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.4 主要的实验仪器和设备 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 2.2.1 质粒pCP115-mob的构建 | 第43-45页 |
| 2.2.2 acuC敲除载体pCP115-mob-kan-acuC的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.3 接合转移进行基因敲除 | 第46-47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-48页 |
| 3.1 敲除载体的构建 | 第47页 |
| 3.2 利用质粒pCP115-mob-kan-acuC进行acuC基因敲除 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 利用温度敏感质粒pKVM2尝试敲除acuC基因 | 第50-58页 |
| 1. 前言 | 第50页 |
| 2. 材料与方法 | 第50-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第50-51页 |
| 2.1.2 实验用培养基 | 第51页 |
| 2.1.3 主要的实验用生化试剂 | 第51-52页 |
| 2.1.4 主要的实验仪器和设备 | 第52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 2.2.1 获取目的片段 | 第52-53页 |
| 2.2.2 构建敲除载体 | 第53-54页 |
| 2.2.3 接合转移进行基因敲除 | 第54-55页 |
| 3. 实验结果 | 第55-57页 |
| 3.1 acuC基因敲除载体pKVM2-kan-acuC的构建 | 第55-56页 |
| 3.2 通过接合转移进行acuC基因敲除以及转化子验证 | 第56-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 利用pCRISPER-Cas9系统尝试敲除acuC基因 | 第58-64页 |
| 1. 前言 | 第58-59页 |
| 2. 材料与方法 | 第59-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第59页 |
| 2.1.3 实验培养基 | 第59页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第59-60页 |
| 2.1.5 实验仪器和设备 | 第60-61页 |
| 2.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 2.2.1 敲除载体pCP115-mob-kan-Cas9-acuC的构建 | 第61-63页 |
| 3. 实验结果 | 第63-64页 |
| 3.1 质粒pCP115-mob-kan的构建 | 第63页 |
| 3.2 质粒pCP115-mob-kan-Cas9的构建 | 第63-64页 |
| 全文总结与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-79页 |
| 附录1 实验中用到的PCR引物 | 第71-72页 |
| 附录2 论文中使用的英文及英文对照 | 第72-73页 |
| 附录3 常用溶液的配制方法 | 第73-75页 |
| 附录4. 常用的数据库和网上生物学资源 | 第75-76页 |
| 附录5. 实验中使用菌株和载体的性质和图谱 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
