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氨基酸诱导寡孢节丛孢形成捕食器官的条件和机制初步研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
第一章 食线虫真菌及捕食器官的研究进展第14-33页
    1. 植物病原线虫的危害与防治第14-15页
    2. 食线虫真菌及其在线虫生物防治中的作用第15-16页
    3. 食线虫真菌侵染线虫的生物学过程第16-18页
    4. 捕食器官(捕器)的形成、诱导、进化和分子机制研究第18-31页
        4.1 捕器的形成和诱导第18-24页
        4.2 捕器的形成和进化第24-27页
        4.3 捕器的结构特征第27-30页
        4.4 捕器形成的分子机制第30-31页
    5 展望第31-32页
    6 本论文的研究内容和意义第32-33页
第二章 氨基酸对寡孢节丛孢捕食器官的诱导第33-50页
    1 前言第33-34页
    2 材料与方法第34-37页
        2.1 实验材料和仪器第34-35页
            2.1.1 实验菌株第34页
            2.1.2 实验用培养基第34-35页
            2.1.3 实验用生化试剂第35页
            2.1.4 实验用仪器和设备第35页
        2.2 实验方法第35-37页
            2.2.1 寡孢节丛孢的活化和孢子培养第35-36页
            2.2.2 寡孢节丛孢孢子的收集第36页
            2.2.3 寡孢节丛孢捕食器官的诱导第36-37页
    3 实验结果与分析第37-49页
        3.1 寡孢节丛孢孢子的培养和收集第37页
        3.2 甲硫氨酸(Met)诱导寡孢节丛孢产捕器第37-38页
        3.3 色氨酸(Trp)诱导寡孢节丛孢产捕器第38-39页
        3.4 苯丙氨酸(Phe)诱导寡孢节丛孢产捕器第39-40页
        3.5 缬氨酸(Val)诱导寡孢节丛孢产捕器第40-42页
        3.6 亮氨酸(Leu)诱导寡孢节丛孢产捕器第42-43页
        3.7 赖氨酸(Lys)诱导寡孢节丛孢产捕器第43-44页
        3.8 谷氨酸(Glu)诱导寡孢节丛孢产捕器第44-45页
        3.9 精氨酸(Arg)诱导寡孢节丛孢产捕器第45-46页
        3.10 组氨酸(His)诱导寡孢节丛孢产捕器第46-47页
        3.11 酪氨酸(Tyr)诱导寡孢节丛孢产捕器第47-49页
    4 小结第49-50页
第三章 氨基酸对环捕节丛孢捕食器官的诱导第50-63页
    1 前言第50页
    2 材料与方法第50-51页
        2.1 实验材料和仪器第50-51页
            2.1.1 实验菌株第50页
            2.1.2 实验用培养基第50页
            2.1.3 实验用生化试剂第50页
            2.1.4 实验用仪器和设备第50-51页
        2.2 实验方法第51页
            2.2.1 环捕节丛孢的活化和孢子培养第51页
            2.2.2 环捕节丛孢孢子的收集第51页
            2.2.3 环捕节丛孢捕食器官的诱导第51页
    3 实验结果与分析第51-62页
        3.1 甲硫氨酸(Met)诱导环捕节丛孢产捕器第51-53页
        3.2 色氨酸(Trp)诱导环捕节丛孢产捕器第53-54页
        3.3 苯丙氨酸(Phe)诱导环捕节丛孢产捕器第54-55页
        3.4 缬氨酸(Val)诱导环捕节丛孢产捕器第55-56页
        3.5 亮氨酸(Leu)诱导环捕节丛孢产捕器第56-57页
        3.6 赖氨酸(Lys)诱导环捕节丛孢产捕器第57-58页
        3.7 谷氨酸(Glu)诱导环捕节丛孢产捕器第58-59页
        3.8 组氨酸(His)诱导环捕节丛孢产捕器第59-60页
        3.9 酪氨酸(Tyr)诱导环捕节丛孢产捕器第60-61页
        3.10 精氨酸(Arg)诱导环捕节丛孢产捕器第61-62页
    4 小结第62-63页
第四章 参与氨基酸调控寡孢节丛孢产生捕食器官的候选基因筛选第63-79页
    1 前言第63-65页
    2 实验材料和仪器第65-66页
        2.1 实验菌株第65页
        2.2 实验用培养基第65页
        2.3 实验用生化试剂第65-66页
        2.4 实验用仪器和设备第66页
    3 实验方法第66-69页
        3.1 寡孢节丛孢的活化和孢子培养第66页
        3.2 寡孢节丛孢孢子的收集第66页
        3.3 寡孢节丛孢捕食器官的诱导第66-67页
        3.4 不同诱导时间点菌丝的收集第67页
        3.5 不同诱导时间点菌丝的总RNA提取第67-68页
        3.6 逆转录获取cDNA第68页
        3.7 Real-Time PCR(相对定量PCR)第68-69页
    4 实验结果第69-77页
        4.1 寡孢节丛孢捕器的诱导第69-70页
        4.2 各时间点样品的相对定量第70-77页
    5 小结第77-79页
第五章 寡孢节丛孢Gcn2和Tor敲除载体的构建、转化和转化子筛选第79-98页
    1 前言第79页
    2 实验材料及仪器第79-82页
        2.1 实验菌株和质粒第79-80页
        2.2 主要溶液及培养基第80-81页
        2.3 主要药品及试剂盒第81页
        2.4 主要仪器及设备第81-82页
    3 实验方法第82-93页
        3.1 基因敲除载体的构建思路第82页
        3.2 基因编号第82-83页
        3.3 敲除引物设计第83-84页
        3.4 寡孢节丛孢基因组DNA提取第84页
        3.5 质粒pCSN44的提取第84-85页
        3.6 扩增目的片段第85-87页
        3.7 酵母感受态制备及电转第87-88页
        3.8 酵母转化子质粒提取第88-90页
        3.9 敲除载体全长片段扩增及回收第90-91页
        3.10 寡孢节丛孢原生质体的制备第91-92页
        3.11 寡孢节丛孢原生质体的转化第92页
        3.12 寡孢节丛孢敲除转化子基因组提取第92页
        3.13 敲除转化子的PCR验证第92-93页
    4 实验结果第93-96页
        4.1 寡孢节丛孢中Tor,Gcn2基因5’端和3’端同源片段及hph扩增第93-94页
        4.2 电转化酵母结果第94页
        4.3 酵母转化子质粒PCR结果第94-95页
        4.4 转化子PCR验证第95-96页
    5 讨论第96-97页
    6 小结第97-98页
第六章 Pex5和Pex7敲除菌株与野生型菌株的表型特征比较第98-109页
    1 前言第98页
    2 实验材料及仪器第98-99页
        2.1 实验菌株第98-99页
        2.2 主要培养基第99页
        2.3 主要药品第99页
        2.4 主要仪器及设备第99页
    3 实验方法第99-101页
        3.1 生长速率的比较第99-100页
        3.2 产孢的比较第100页
        3.3 产捕器(三维菌网)比较第100页
        3.4 胞外蛋白酶活性比较第100-101页
        3.5 逆境生长情况比较第101页
    4 实验结果第101-106页
        4.1 生长速率比较第101-103页
        4.2 产孢的比较第103-104页
        4.3 产捕器(三维菌网)比较第104-105页
        4.4 胞外蛋白酶活性比较第105-106页
        4.5 逆境生长测试结果第106页
    5 讨论第106-108页
        5.1 生长速率的比较第106-107页
        5.2 产孢比较第107页
        5.3 产捕器比较第107页
        5.4 产胞外蛋白酶比较第107页
        5.5 抗逆性比较第107-108页
    6 小结第108-109页
全文小结第109-111页
参考文献第111-119页
附录第119-126页
    附录1. 论文中使用的缩写及中英文对照第119-120页
    附录2. 论文中使用的储存液、缓冲液和染色液的配制第120-122页
    附录3. 论文中定量基因所使用的引物序列第122-124页
    附录4. 论文中使用的质粒图谱第124-125页
    附录5. 在读硕士期间(待)发表、撰写的学术论文第125-126页
致谢第126页

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