| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 类转录激活因子效应物核酸酶(TALENZs)研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 TALEN基因打靶技术概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 骨架优化 | 第13-14页 |
| 1.1.3 DNA识别的特异性 | 第14-16页 |
| 1.1.4 TALE重复单元的组装 | 第16-19页 |
| 1.2 结核病的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.2.1 结核病概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 结核病的发病机理 | 第20-23页 |
| 1.2.2.1 细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.2.2.2 细胞坏死 | 第21-23页 |
| 1.2.3 分枝杆菌感染信号传导所累及的巨噬细胞死亡 | 第23-25页 |
| 1.3 朊蛋白疾病的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.1 阮病毒概述 | 第25-26页 |
| 1.3.2 朊蛋白相关疾病的原因 | 第26页 |
| 1.3.3 各类朊蛋白疾病的临床及病理特征 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 小鼠SP110基因功能验证 | 第28-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 材料 | 第28页 |
| 2.1.2 试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 山羊肺泡巨噬细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 山羊肺泡巨噬细胞的分离 | 第29页 |
| 2.2.1.2 台盼蓝染色检测细胞存活率 | 第29页 |
| 2.2.1.3 肺泡巨噬细胞培养特性观察 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4 吞噬鸡红细胞试验 | 第30页 |
| 2.2.1.5 流式细胞术分析细胞纯度 | 第30页 |
| 2.2.2 SP110真核表达载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.3 细胞CFU计数 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-36页 |
| 2.3.1 山羊肺泡巨噬细胞的分离 | 第31-34页 |
| 2.3.1.1 分离细胞的培养与形态观察 | 第31-32页 |
| 2.3.1.2 吞噬鸡红细胞试验 | 第32-33页 |
| 2.3.1.3 流式细胞术分析巨噬细胞纯度 | 第33-34页 |
| 2.3.2 SP110真核表达载体构建 | 第34-35页 |
| 2.3.3 荷菌数计数 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 TALEN真核表达载体的构建及活性验证 | 第37-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.2 试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 TALEN真核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.2 TALEN质粒转染C28细胞 | 第40页 |
| 3.2.3 TALEN打靶载体活性验证 | 第40-42页 |
| 3.2.3.1 PCR扩增打靶位点序列分析打靶效率 | 第40-41页 |
| 3.2.3.2 T7E1酶切和BamHI酶切分析打靶位点 | 第41-42页 |
| 3.2.3.3 TA克隆确定打靶效率 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 TALENs真核表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.3.2 TALENs打靶载体活性验证 | 第44-46页 |
| 3.3.2.1 混合细胞克隆的获得和PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2.2 T7E1酶切和BamHI酶切分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2.3 TA克隆确定打靶效率 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 SP110定点打靶细胞筛选及转基因羊生产 | 第48-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 材料 | 第48页 |
| 4.1.2 试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 仪器 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-55页 |
| 4.2.1 打靶载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2 细胞筛选及验证 | 第50-52页 |
| 4.2.2.1 阳性细胞克隆的筛选 | 第50页 |
| 4.2.2.2 PCR鉴定基因打靶的阳性细胞克隆 | 第50-52页 |
| 4.2.3 体细胞核移植生产转基因羊 | 第52-55页 |
| 4.2.3.1 卵母细胞成熟培养及转基因克隆胚的构建 | 第52页 |
| 4.2.3.2 转基因克隆胚的体外培养及移植 | 第52页 |
| 4.2.3.3 转基因羊基因型分析 | 第52页 |
| 4.2.3.4 转基因羊朊蛋白表达情况分析 | 第52-55页 |
| 4.3 结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 打靶载体构建 | 第55-57页 |
| 4.3.2 细胞筛选及验证 | 第57-59页 |
| 4.3.3 体细胞核移植生产转基因羊 | 第59-62页 |
| 4.3.3.1 转基因羊基因型分析 | 第60-61页 |
| 4.3.3.2 转基因羊朊蛋白表达情况分析 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 全文结论 | 第63-64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
