| 英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-32页 |
| 1 流感病毒简介 | 第16-21页 |
| 1.1 流感病毒的结构 | 第16-18页 |
| 1.2 流感病毒的传播方式 | 第18页 |
| 1.3 影响流感病毒传播的因素 | 第18-21页 |
| 1.3.1 外界环境因素 | 第18-19页 |
| 1.3.2 病毒自身因素 | 第19-20页 |
| 1.3.3 宿主遗传特性因素 | 第20-21页 |
| 1.4 流感病毒的危害及研究现状 | 第21页 |
| 2 可视化病毒研究进展 | 第21-28页 |
| 2.1 利用荧光蛋白示踪病毒的研究进展 | 第24-26页 |
| 2.2 利用荧光素酶基因来示踪病毒的研究进展 | 第26-27页 |
| 2.3 其他示踪病毒技术的研究进展 | 第27-28页 |
| 3 流感病毒气溶胶的研究进展 | 第28-30页 |
| 3.1 气溶胶粒子在呼吸系统的分布特性 | 第28-29页 |
| 3.2 流感病毒气溶胶研究的动物模型 | 第29-30页 |
| 4 研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 5 研究技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 重组荧光素酶甲型H1N1流感病毒（IAV-Gluc）的构建与鉴定 | 第32-49页 |
| 1 材料 | 第32-35页 |
| 1.1 毒株、细胞和鸡胚 | 第32页 |
| 1.2 菌株及质粒 | 第32-34页 |
| 1.3 主要试剂及耗材 | 第34-35页 |
| 1.3.1 酶类 | 第34页 |
| 1.3.2 化学试剂和耗材 | 第34页 |
| 1.3.3 生物试剂及试剂盒 | 第34-35页 |
| 1.4 常用仪器 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-42页 |
| 2.1 病毒的增殖 | 第35页 |
| 2.2 病毒基因组RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3 病毒基因组的cDNA合成（RT-PCR） | 第36-39页 |
| 2.3.1 PCR引物设计 | 第36-37页 |
| 2.3.2 反转录 | 第37-38页 |
| 2.3.3 病毒全长cDNA的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.4 流感病毒8个转录/表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.1 PCR产物回收与纯化 | 第39页 |
| 2.4.2 连接反应 | 第39页 |
| 2.4.3 连接产物的转化 | 第39页 |
| 2.4.4 阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4.5 共转染8质粒的制备 | 第40页 |
| 2.5 流感病毒的拯救 | 第40-41页 |
| 2.6 拯救病毒的增殖传代 | 第41页 |
| 2.7 拯救病毒的鉴定 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| 3.1 重组IAV-Gluc基因组八质粒的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.1 重组NA序列的构建 | 第42页 |
| 3.1.2 其他7个基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 3.1.3 重组IAV-Gluc病毒其他7质粒构建 | 第42-43页 |
| 3.2 病毒拯救 | 第43页 |
| 3.3 病毒拯救结果的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3.1 血凝实验 | 第43页 |
| 3.3.2 RT-PCR扩增鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 拯救病毒的透射电镜观察 | 第44页 |
| 3.3.4 荧光素酶报活性检测结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 八质粒拯救系统 | 第46页 |
| 4.2 用于克隆的cDNA序列准确性 | 第46页 |
| 4.3 影响病毒拯救效率的因素 | 第46-47页 |
| 4.4 病毒拯救的鉴定 | 第47-48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 IAV-Gluc生物学特性的研究 | 第49-68页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| 1.1 病毒株、细胞和鸡胚 | 第49页 |
| 1.2 实验动物 | 第49页 |
| 1.3 主要试剂及药品 | 第49-50页 |
| 1.4 常用仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-55页 |
| 2.1 病毒的增殖传代 | 第50-51页 |
| 2.2 IAV-Gluc表达Gaussia luciferase的遗传稳定性 | 第51页 |
| 2.3 IAV-Gluc生物发光半衰期测定 | 第51页 |
| 2.4 IAV-Gluc的致病性 | 第51-52页 |
| 2.4.1 毒株的EID50的测定 | 第51页 |
| 2.4.2 IAV-Gluc对BALB/c小鼠的致病性 | 第51-52页 |
| 2.4.3 IAV-Gluc攻毒BALB/c小鼠肺组织和气管病理切片的制备 | 第52页 |
| 2.5 IAV-Gluc在豚鼠间的传播能力 | 第52-54页 |
| 2.6 病毒体外增殖能力测定 | 第54页 |
| 2.6.1 病毒在MDCK细胞上的增殖能力 | 第54页 |
| 2.6.2 病毒在SPF鸡胚上的增殖能力 | 第54页 |
| 2.7 IAV-Gluc的受体结合能力测定 | 第54-55页 |
| 2.8 重组病毒的NA活性测定 | 第55页 |
| 2.9 不同滴度IAV-Gluc病毒尿囊液的生物发光测定 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-65页 |
| 3.1 IAV-Gluc的稳定性分析 | 第55-57页 |
| 3.1.1 IAV-Gluc中Gluc的遗传稳定性 | 第55-56页 |
| 3.1.2 Gluc的生物发光半衰期测定 | 第56页 |
| 3.1.3 不同浓度IAV-Gluc病毒尿囊液的生物发光强度测定 | 第56-57页 |
| 3.2 IAV-Gluc的致病性分析 | 第57-60页 |
| 3.2.1 IAV-Gluc的鸡胚半数感染量（EID_(50)）测定 | 第57-58页 |
| 3.2.2 IAV-Gluc对BALB/c小鼠的致病性 | 第58-59页 |
| 3.2.3 小鼠肺组织和气管病理切片结果 | 第59-60页 |
| 3.3 IAV-Gluc在豚鼠间的传播能力分析 | 第60-61页 |
| 3.4 IAV-Gluc的增殖能力分析 | 第61-63页 |
| 3.4.1 IAV-Gluc与野生毒株在SPF鸡胚上增殖能力的比较 | 第61页 |
| 3.4.2 IAV-Gluc与野生毒株在MDCK细胞上增殖能力的比较 | 第61-63页 |
| 3.5 IAV-Gluc的受体结合能力分析 | 第63页 |
| 3.6 IAV-Gluc的NA活性分析 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 4.1 外源片段的插入对重组病毒毒力的影响 | 第65-66页 |
| 4.2 Gluc在动物体内生物发光稳定性 | 第66页 |
| 4.3 IAV-Gluc引发肺损伤效应 | 第66-67页 |
| 4.4 IAV-Gluc的受体结合特性与NA活性 | 第67页 |
| 5 小结 | 第67-68页 |
| 第四章 IAV-Gluc在呼吸道内的可视化监测研究 | 第68-82页 |
| 1 材料 | 第68-69页 |
| 1.1 病毒株、细胞和鸡胚 | 第68-69页 |
| 1.2 主要试剂及药品 | 第69页 |
| 1.3 实验动物 | 第69页 |
| 1.4 实验仪器 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-72页 |
| 2.1 病毒的增殖纯化 | 第69页 |
| 2.2 滴鼻感染BALB/c小鼠 48h后的活体成像 | 第69页 |
| 2.3 IAV-Gluc的实时可视化动态监测 | 第69-70页 |
| 2.4 感染BABL/c小鼠肺组织病毒滴度测定 | 第70页 |
| 2.5 肺组织匀浆液生物发光强弱与病毒载量的相关性分析 | 第70页 |
| 2.6 荧光定量PCR检测方法的建立 | 第70-72页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第70页 |
| 2.6.2 RNA提取和cDNA制备 | 第70页 |
| 2.6.3 标准品的制备与稀释 | 第70-71页 |
| 2.6.4 荧光定量PCR检测 | 第71-72页 |
| 2.7 数据的统计分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-78页 |
| 3.1 攻毒剂量的筛选 | 第72-73页 |
| 3.2 滴鼻感染小鼠IAV-Gluc实时监测 | 第73-74页 |
| 3.3 感染小鼠肺部的病毒增殖结果 | 第74-75页 |
| 3.4 不同检测方法对豚鼠感染鉴定结果比较 | 第75-78页 |
| 3.4.1 qRT-PCR标准曲线建立 | 第75-76页 |
| 3.4.2 不同批次间和批次内qRT-PCR重复性分析 | 第76-77页 |
| 3.4.3 不同检测方法对滴鼻豚鼠感染鉴定结果比较 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| 4.1 生物发光技术用于动物活体成像的优势 | 第78-80页 |
| 4.2 不同报告基因应用于体外成像的示踪能力比较 | 第80页 |
| 4.3 可视化流感病毒可用于快速鉴定病毒感染 | 第80-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 第五章 气溶胶与滴鼻感染时病毒在呼吸道沉积与复制的比较研究 | 第82-95页 |
| 1 材料 | 第82-83页 |
| 1.1 病毒株、细胞和鸡胚 | 第82页 |
| 1.2 主要试剂及药品 | 第82页 |
| 1.3 主要仪器 | 第82-83页 |
| 1.4 实验动物 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-86页 |
| 2.1 豚鼠的滴鼻感染 | 第83页 |
| 2.2 豚鼠的气溶胶感染 | 第83-85页 |
| 2.2.1 病毒气溶胶的发生 | 第83-84页 |
| 2.2.2 气溶胶感染豚鼠 | 第84页 |
| 2.2.3 暴露仓内病毒气溶胶粒径相关参数测定 | 第84页 |
| 2.2.4 暴露仓内病毒气溶胶采集及浓度测定 | 第84-85页 |
| 2.2.5 病毒气溶胶感染吸入剂量的计算 | 第85页 |
| 2.3 质粒标准品的制备 | 第85页 |
| 2.4 病毒拷贝数的计算 | 第85页 |
| 2.5 滴鼻和气溶胶感染豚鼠后病毒在肺部的沉积率比较 | 第85-86页 |
| 2.6 肺组织滴定 | 第86页 |
| 2.7 豚鼠肺脏水肿程度评价 | 第86页 |
| 2.8 数据的统计分析 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-92页 |
| 3.1 流感病毒气溶胶粒径分布 | 第86页 |
| 3.2 病毒气溶胶感染吸入剂量的计算结果 | 第86-87页 |
| 3.3 豚鼠肺部病毒沉积率 | 第87-89页 |
| 3.4 豚鼠肺脏水肿程度比较 | 第89页 |
| 3.5 滴鼻与气溶胶方式感染豚鼠的病毒复制效率比较 | 第89-92页 |
| 4 讨论 | 第92-93页 |
| 4.1 气溶胶粒子在呼吸系统的沉积 | 第92页 |
| 4.2 病毒在滴鼻与气溶胶感染方式下呼吸道沉积和致病能力的比较 | 第92-93页 |
| 4.3 暴露系统及发生装置的选择 | 第93页 |
| 5 小结 | 第93-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-111页 |
| 附录 | 第111-118页 |
| 个人简历 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
