| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 双组分系统的发现和研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2 双组分系统的结构 | 第11-12页 |
| 1.3 双组分系统的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.4 光遗传学技术的应用 | 第13-14页 |
| 1.5 感光双组分系统的作用机理 | 第14-15页 |
| 1.6 课题研究的意义 | 第15-16页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第16-40页 |
| 2.1 质粒和菌种 | 第16页 |
| 2.2 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.3 DH5α感受态的制备 | 第17-19页 |
| 2.3.1 试剂 | 第17-18页 |
| 2.3.2 制备方法 | 第18-19页 |
| 2.4 DH5α基因组抽提 | 第19-20页 |
| 2.4.1 试剂 | 第19页 |
| 2.4.2 基因组抽提方法 | 第19-20页 |
| 2.5 组氨酸激酶片段的克隆 | 第20-23页 |
| 2.5.1 组氨酸激酶序列信息的获取 | 第20页 |
| 2.5.2 引物的设计 | 第20页 |
| 2.5.3 引物的处理 | 第20-21页 |
| 2.5.4 试剂 | 第21页 |
| 2.5.5 PCR反应体系 | 第21页 |
| 2.5.6 PCR的反应程序 | 第21-22页 |
| 2.5.7 PCR产物回收 | 第22-23页 |
| 2.5.8 电泳检测回收产物的效率 | 第23页 |
| 2.6 双酶切反应 | 第23-25页 |
| 2.6.1 试剂 | 第23页 |
| 2.6.2 双酶切体系 | 第23-24页 |
| 2.6.3 酶切产物的纯化 | 第24-25页 |
| 2.6.4 电泳检测回收效率 | 第25页 |
| 2.7 连接反应 | 第25页 |
| 2.8 将连接产物转化到DH5α感受态 | 第25-27页 |
| 2.8.1 试剂 | 第25-26页 |
| 2.8.2 转化步骤 | 第26-27页 |
| 2.9 抽提质粒 | 第27-29页 |
| 2.9.1 试剂 | 第27页 |
| 2.9.2 质粒抽提 | 第27-28页 |
| 2.9.3 重组质粒的双酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.10 含有酶切位点的靶基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.10.1 引物的设计 | 第29页 |
| 2.10.2 试剂与仪器 | 第29页 |
| 2.10.3 PCR反应体系 | 第29页 |
| 2.10.4 PCR反应程序 | 第29页 |
| 2.10.5 PCR产物的回收和效率检测 | 第29页 |
| 2.10.6 目的片段与载体的连接体系 | 第29-30页 |
| 2.10.7 转化、质粒的抽提和检测 | 第30页 |
| 2.11 多组HK的重组质粒的构建 | 第30页 |
| 2.12 目的片段的克隆 | 第30-32页 |
| 2.12.1 试剂 | 第31页 |
| 2.12.2 PCR反应体系 | 第31页 |
| 2.12.3 PCR反应程序 | 第31-32页 |
| 2.12.4 PCR产物的胶回收 | 第32页 |
| 2.12.5 琼脂糖凝胶电泳的检测 | 第32页 |
| 2.13 PCR产物和载体的线性化 | 第32-33页 |
| 2.13.1 试剂 | 第32页 |
| 2.13.2 酶切反应体系 | 第32-33页 |
| 2.13.3 双酶切产物的纯化 | 第33页 |
| 2.13.4 回收产物的电泳检测 | 第33页 |
| 2.14 目的片段与载体的连接 | 第33页 |
| 2.15 连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 2.16 重组质粒的抽提以及琼脂糖凝胶验证 | 第34页 |
| 2.17 质粒pPCB | 第34页 |
| 2.18 缺陷型大肠杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| 2.19 感光系统的筛选 | 第34-37页 |
| 2.19.1 试剂 | 第34-35页 |
| 2.19.2 光控信号传导通路实验步骤 | 第35-36页 |
| 2.19.3 数据的处理 | 第36-37页 |
| 2.20 光频实验 | 第37-40页 |
| 2.20.1 试剂 | 第37页 |
| 2.20.2 实验的方法 | 第37-38页 |
| 2.20.3 数据的处理 | 第38-40页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第40-56页 |
| 3.1 感光系统的构建 | 第40-42页 |
| 3.2 感光系统的筛选 | 第42-52页 |
| 3.3 UhpB-UhpA感光双组分系统的光频实验 | 第52-56页 |
| 第4章 总结与讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第72页 |