| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第—章 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 课题来源、研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外研究概况 | 第12-15页 |
| 1.2.1 国外研究概况 | 第12-14页 |
| 1.2.2 国内研究概况 | 第14-15页 |
| 1.3 论文的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-31页 |
| 2.1 实验动物及仪器设备 | 第16-19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.2 实验流程与方法 | 第19-31页 |
| 2.2.1 含目的基因PDX-1,NeuroD,MafA腺病毒载体的构建及包装 | 第19页 |
| 2.2.2 重组腺病毒滴度测定 | 第19-20页 |
| 2.2.3 MEFs的分离培养及饲养细胞的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.4 MEFs受染重编程为小鼠iPS细胞 | 第21-22页 |
| 2.2.5 碱性磷酸酶染色 | 第22页 |
| 2.2.6 核型分析 | 第22-23页 |
| 2.2.7 拟胚体形成 | 第23页 |
| 2.2.8 畸胎瘤形成实验 | 第23页 |
| 2.2.9 RT-PCR | 第23-27页 |
| 2.2.10 细胞免疫荧光 | 第27-28页 |
| 2.2.11小鼠iPS细胞受染分化为胰岛类P细胞 | 第28页 |
| 2.2.12 ELISA | 第28-29页 |
| 2.2.13 细胞移植 | 第29页 |
| 2.2.14 免疫组化检测 | 第29-30页 |
| 2.2.15 统计学处理 | 第30-31页 |
| 第三章 结果 | 第31-47页 |
| 3.1 获得具有侵袭力的含目的基因的腺病毒 | 第31-32页 |
| 3.2 获得具有侵袭力的含目的基因的慢病毒 | 第32-34页 |
| 3.2.1 含目的基因Oct4/Sox2/Klf4/cMyc的慢病毒载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 慢病毒的包装及滴度测定 | 第33-34页 |
| 3.3 MEFs的获取 | 第34-35页 |
| 3.4 小鼠IPS细胞的诱导 | 第35-36页 |
| 3.5 小鼠IPS细胞的鉴定 | 第36-40页 |
| 3.5.1 碱性磷酸酶活性检测 | 第36-37页 |
| 3.5.2 干细胞表面标记的免疫染色检测 | 第37页 |
| 3.5.3 干细胞内源基因的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.5.4 核型检测 | 第38-39页 |
| 3.5.5 拟胚体形成及三胚层基因的检测 | 第39页 |
| 3.5.6 畸胎瘤形成实验 | 第39-40页 |
| 3.6 胰岛素分泌细胞的获取及鉴定 | 第40-47页 |
| 3.6.1 Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP及Ad-mMafA-IRES-GFP转染小鼠iPS细胞 | 第40-41页 |
| 3.6.2 胰岛细胞功能基因的检测 | 第41-43页 |
| 3.6.3 免疫荧光检测胰岛素表达 | 第43页 |
| 3.6.4 体外胰岛素分泌的检测 | 第43-44页 |
| 3.6.5 移植细胞体内作用鉴定 | 第44-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 英文缩写词表 | 第55-58页 |
| 综述 | 第58-69页 |
| 综述参考文献 | 第63-69页 |
| 在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目 | 第69-70页 |
| A：在国内外刊物上发表的论文 | 第69页 |
| B：所参加的项目 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
