| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·转录因子GATA4概述 | 第12-16页 |
| ·GATA4的基本结构 | 第12-13页 |
| ·GATA4的研究现状 | 第13-16页 |
| ·表皮生长因子EGF概述 | 第16-20页 |
| ·EGF家族成员及相应受体 | 第16-17页 |
| ·EGF家族在心脏研究领域的研究现状 | 第17-18页 |
| ·EGF受体在心脏领域的研究现状 | 第18-19页 |
| ·基质金属蛋白酶以及金属蛋白酶组织抑制剂在心脏功能维持中的作用 | 第19-20页 |
| ·STAT3概述 | 第20-25页 |
| ·STAT3基本结构 | 第21-22页 |
| ·STAT3相关的信号通路 | 第22-23页 |
| ·STAT3在心脏领域的研究现状 | 第23-25页 |
| 2 构建含EGF启动子的报告基因 | 第25-35页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·大鼠基因组的提取 | 第27页 |
| ·基因组DNA浓度测定 | 第27页 |
| ·PCR扩增rat EGF Promoter片段 | 第27-28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28-29页 |
| ·PCR产物及载体pGL3-basic的酶切制备 | 第29-30页 |
| ·DNA片段连接 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30-31页 |
| ·质粒小量提取 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·质粒的测序鉴定 | 第32页 |
| ·实验结果与讨论 | 第32-34页 |
| ·PCR扩增EGF启动子 | 第32-34页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒测序 | 第34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 3 GATA4与STAT3存在相互作用 | 第35-46页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35-39页 |
| ·质粒和细胞系 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| ·实验试剂 | 第36-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·293T细胞培养及传代 | 第39-40页 |
| ·293T细胞磷酸钙转染 | 第40-41页 |
| ·细胞核蛋白提取 | 第41页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第41-42页 |
| ·免疫共沉淀 | 第42-43页 |
| ·Western Blotting | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-45页 |
| ·在细胞内GATA4结合STAT3 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 4 GATA4和STAT3体外相互作用 | 第46-73页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第47-49页 |
| ·实验方法 | 第49-59页 |
| ·BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增STAT3的各个截短体 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增3xflag片段 | 第51-52页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳后胶回收 | 第52页 |
| ·STAT3 PCR产物及载体pGEX-4T-3和pcDNA3.1(+)的双酶切 | 第52页 |
| ·3xflag PCR产物及T7-luciferase control DNA construct和真核表达载体pcDNA3.1(+)的酶切 | 第52-54页 |
| ·3xflag-GATA4不同截短体真核表达载体的构建 | 第54页 |
| ·DNA片段连接 | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·质粒小量提取 | 第54页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第54页 |
| ·质粒的测序鉴定 | 第54页 |
| ·构建重组质粒的大量提取 | 第54-55页 |
| ·GST-STAT3不同截短体诱导表达 | 第55-56页 |
| ·GST-STAT3不同截短体诱导表达的最适合条件 | 第56页 |
| ·50%slurry of Glutathione Sepharose 4B的制备 | 第56-57页 |
| ·原核表达蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的染色及脱色 | 第57-58页 |
| ·体外转录与翻译 | 第58页 |
| ·GST pull-down | 第58页 |
| ·Western Blotting | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-71页 |
| ·STAT3蛋白不同截短体的真核及原核表达载体的构建 | 第59-62页 |
| ·pcDNA3.1(+)-3xflag的构建 | 第62-64页 |
| ·pcDNA3.1(+)-3xflag-gata4不同截短体的表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·3xflag-T7-luciferase重组质粒的构建 | 第65-67页 |
| ·GST-STAT3及其截短体的原核表达及纯化 | 第67-68页 |
| ·GATA4各个不同截短体的体外转录与翻译 | 第68-69页 |
| ·与STAT3结合的GATA4区域检测 | 第69-71页 |
| ·与GATA4结合的STAT3区域检测 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 5 GATA4和STAT3协同激活EGF启动子活性 | 第73-82页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·实验细胞系 | 第73页 |
| ·实验仪器 | 第73页 |
| ·实验试剂 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·NIH3T3细胞培养及传代 | 第74页 |
| ·NIH3T3细胞磷酸钙转染 | 第74-78页 |
| ·荧光素酶活性的测定 | 第78页 |
| ·实验结果及结论 | 第78-81页 |
| ·GATA4激活EGF启动子活性的检测 | 第78-79页 |
| ·STAT3激活EGF启动子活性的检测 | 第79-80页 |
| ·GATA4和STAT3协同激活EGF启动子活性的检测 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
