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拟南芥转录因子TCPs和表观遗传因子CLF及LHP1抑制KNOX基因的分子机制研究

中文摘要第5-6页
英文摘要第6页
文献综述第8-37页
    综述1:拟南芥Ⅰ类KNOX基因研究进展第8-20页
        1 同源异型转化与同源异型盒基因第8页
        2 KNOX基因的分类第8-9页
        3 KNOX蛋白的功能结构域第9页
        4 KNOX基因的相互作用因子第9-11页
        5 KNOX基因的表达谱第11-12页
        6 Ⅰ类KNOX基因维持干细胞的未分化状态第12-14页
        7 一系列转录因子参与Ⅰ类KNOX基因的表达调控第14-16页
        8 表观遗传因子参与Ⅰ类KNOX基因的表达调控第16-17页
        9 植物激素与Ⅰ类KNOX基因之间的调控关系第17-19页
        10 展望第19-20页
    综述2:植物组蛋白甲基化研究进展第20-37页
        1 经典遗传学与表观遗传学第20页
        2 表观遗传学的基本内容第20-21页
        3 组蛋白甲基化修饰第21-22页
        4 组蛋白赖氨酸甲基转移酶第22-29页
            4.1 TRX家族与H3K4甲基化第24页
            4.2 ASH1家族与H3K36甲基化第24-25页
            4.3 SU(VAR)家族与H3K9甲基化第25-26页
            4.4 E(Z)家族与H3K27甲基化第26-29页
        5 精氨酸甲基转移酶第29-30页
        6 组蛋白甲基化识别蛋白第30-31页
        7 组蛋白去甲基化酶第31-33页
        8 组蛋白甲基化与其他表观遗传途径的关系第33-35页
        9 展望第35-37页
第一部分 研究目的第37-38页
第二部分 材料与方法第38-62页
    1.实验材料第38页
    2.植物培养第38页
    3.分子克隆基本实验第38-40页
    4.各种PCR反应第40-41页
    5.Top10细菌感受态制备及转化第41-42页
    6.GV3101农杆菌电击感受态制备及转化第42页
    7.酵母双杂交和β-Galactosidase酶活测定第42-44页
    8.质粒小量提取(碱法)第44页
    9.植物基因组DNA抽提第44-45页
    10.植物RNA抽提和反转录PCR第45-46页
    11.花浸染法转化拟南芥及转化子筛选第46-48页
    12.在烟草中瞬时表达蛋白第48页
    13.蛋白原核表达和纯化第48-51页
    14. GST pull down第51-52页
    15.免疫共沉淀(Co-IP)第52-53页
    16.染色质免疫共沉淀(ChIp)第53-56页
    17. Western杂交第56-57页
    18.植物组织GUS染色第57-58页
    19.扫描电子显微镜样品制备及观察第58页
    20.植物拍摄和激光共聚焦显微镜观察第58-62页
第三部分 实验结果第62-92页
    第一节:TCP转录因子和AS2相互作用负调控KNOX基因第62-75页
        1 AS2和TCP家族成员能相互作用第62-66页
            1.1 AS2蛋白筛选酵母文库第62-63页
            1.2 pull down实验证明AS2和TCP成员的相互作用第63-64页
            1.3 Co-IP实验证明AS2和TCP成员的相互作用第64-66页
        2 AS1/AS2和TCP成员的遗传相互作用分析第66-68页
        3 突变体背景下KNOX基因表达分析第68-70页
        4 AS2和TCP可以结合到8P和KNAT2基因启动子的相同区域第70-73页
        5 TCP结合BP和KNAT2启动子依赖于AS2第73-74页
        6 jaw-D背景下TCP表达下调不影响AS2结合BP和KNAT2启动子的活性第74-75页
    第二节:Ⅰ类KNOX基因H3K27me3修饰建立的分子机制初探第75-79页
        1 TCP3和CLF能相互作用第75-77页
            1.1 酵母双杂交发现TCP3和CLF能相互作用第75页
            1.2 pull down实验证明TCP3和CLF能相互作用第75-76页
            1.3 Co-IP实验证明TCP3和CLF能相互作用第76-77页
        2 CLF调控Ⅰ类KNOX基因表达第77页
        3 CLF结合Ⅰ类KNOX基因与AS2和TCP的关系第77-79页
    第三节:表观遗传因子LHP1和AS1/AS2相互作用负调控KNOX基因第79-92页
        1 AS1/AS2和LHP1能相互作用第79-83页
            1.1 酵母双杂交发现AS1/AS2和LHP1能相互作用第79页
            1.2 GST-His pull down实验证明AS1/AS2和LHP1能相互作用第79-80页
            1.3 GST-植物材料pull down实验证明AS1/AS2和LHP1能相互作用第80-81页
            1.4 AS1/AS2与LHP1共定位及FRET分析第81-82页
            1.5 BiFC实验证明AS1/AS2和LHP1在植物体内能相互作用第82-83页
        2 AS1/AS2与LHP1遗传相互作用分析第83-86页
        3 突变体背景下KNOX基因的表达分析第86-88页
        4 突变体背景下Ⅰ类KNOX基因H3K27m3表观遗传修饰分析第88-89页
        5 突变体背景下LHP1结合KNOX基因活性分析第89-92页
第四部分 讨论第92-98页
参考文献第98-121页
攻读博士期间已发表及待发表论文第121-122页
致谢第122-123页

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