| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 英文缩略词表 | 第16-22页 |
| 1 绪论 | 第22-31页 |
| 1.1 高龄引起的骨合成能力降低是一个亟需重视的问题 | 第22-23页 |
| 1.2 衰老导致的骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)的相应改变是引起骨合成能力减低的重要原因之一 | 第23页 |
| 1.3 基因水平调控BMSCs的成骨能力可能为骨再生提供了新的方向 | 第23-24页 |
| 1.4 IGFBP7可能在BMSCs在干细胞成骨分化中发挥作用 | 第24-26页 |
| 1.5 参考文献 | 第26-31页 |
| 2 第一章 在BMSCs中IGFBP7基因的表达与年龄相关 | 第31-71页 |
| 2.1 引言 | 第31-34页 |
| 2.2 主要实验材料和仪器 | 第34-39页 |
| 2.2.1 主要实验材料和试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.3 相关溶液的配制 | 第36-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-50页 |
| 2.3.1 人骨髓来源的间充质干细胞的提取与培养 | 第39-40页 |
| 2.3.2 人BMSCs流式细胞鉴定 | 第40页 |
| 2.3.3 人BMSCs成骨、成软骨和成脂肪三系诱导分化及鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.4 细胞衰老染色----β半乳糖染色 | 第43页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR (RT-qPCR) | 第43-47页 |
| 2.3.6 Western Blot蛋白的制样 | 第47页 |
| 2.3.7 Western Blot的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第47-48页 |
| 2.3.8 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA) | 第48-49页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第49-50页 |
| 2.4 实验结果 | 第50-59页 |
| 2.4.1 人BMSCs原代的分离培养及其鉴定 | 第50-54页 |
| 2.4.2 年轻人和高龄老人血清中IGFBP7的表达情况 | 第54-55页 |
| 2.4.3 年轻人和高龄老人BMSCs中成骨相关基因及IGFBP7的表达情况 | 第55页 |
| 2.4.4 BMSCs不同代数之间IGFBP7、成骨特异性的基因以及衰老标志物的表达比较 | 第55-57页 |
| 2.4.5 不同年龄组(年轻组和高龄组),不同代数之间的β-catenin蛋白的表达情况比较 | 第57页 |
| 2.4.6 未分化的BMSCs与分化后的BMSCs的IGFBP7的表达差异情况 | 第57-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-62页 |
| 2.6 结论 | 第62-63页 |
| 2.7 参考文献 | 第63-71页 |
| 3 第二章 IGFBP7对BMSCs成骨分化的作用及其机制研究 | 第71-104页 |
| 3.1 引言 | 第71-73页 |
| 3.2 主要实验材料和仪器 | 第73-75页 |
| 3.2.1 主要实验材料和试剂 | 第73-74页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第74页 |
| 3.2.3 相关溶液的配制 | 第74-75页 |
| 3.3 实验方法 | 第75-80页 |
| 3.3.1 人BMSCs的获取、纯化和培养 | 第75页 |
| 3.3.2 过表达(overexpression)和敲低(knockdown) BMSCs中IGFBP7的表达 | 第75-76页 |
| 3.3.3 免疫荧光染色 | 第76页 |
| 3.3.4 ALP染色 | 第76-77页 |
| 3.3.5 ALP活性检测 | 第77-78页 |
| 3.3.6 茜素红染色和Von Kossa染色 | 第78页 |
| 3.3.7 实时定量PCR(RT-qPCR)检测 | 第78页 |
| 3.3.8 Western Blot检测 | 第78页 |
| 3.3.9 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的转染 | 第78-79页 |
| 3.3.10 统计学分析 | 第79-80页 |
| 3.4 实验结果 | 第80-94页 |
| 3.4.1 IGFBP7基因敲低的BMSCs构建 | 第80页 |
| 3.4.2 IGFBP7基因过表达的BMSCs构建 | 第80-82页 |
| 3.4.3 慢病毒转染后对BMSCs增殖的影响 | 第82-83页 |
| 3.4.4 过表达IGFBP7加强BMSCs成骨分化特异性的基因表达,敲低IGFBP7降低BMSCs成骨分化特异性基因的表达 | 第83-85页 |
| 3.4.5 IGFPB7对成骨早期标志物ALP活性的影响 | 第85-86页 |
| 3.4.6 IGFPB7对成骨晚期标志物矿化物积累的影响 | 第86-88页 |
| 3.4.7 外源性IGFPB7蛋白对BMSCs成骨分化的影响 | 第88-89页 |
| 3.4.8 在BMSCs成骨分化过程中,过表达IGFPB7加强Wnt/β-catenin信号通路 | 第89-91页 |
| 3.4.9 应用特异性的Wnt/β-catenin信号通路的DKK1,可以明显减弱因为IGFBP7过表达增加的成骨分化效应 | 第91-92页 |
| 3.4.10 应用β-catenin的siRNA,可以明显减弱因为IGFBP7过表达增加的成骨分化效应 | 第92-94页 |
| 3.5 讨论 | 第94-97页 |
| 3.6 结论 | 第97-98页 |
| 3.7 参考文献 | 第98-104页 |
| 4 第三章 过表达IGFBP7的BMSCs膜片可以加速大鼠胫骨骨缺损的愈合 | 第104-128页 |
| 4.1 引言 | 第104-106页 |
| 4.2 主要实验材料和仪器 | 第106-108页 |
| 4.2.1 主要实验材料和试剂 | 第106页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第106-107页 |
| 4.2.3 相关溶液的配制 | 第107-108页 |
| 4.3 实验方法 | 第108-113页 |
| 4.3.1 人BMSCs的提取、纯化和培养 | 第108页 |
| 4.3.2 过表达(overexpression) BMSCs中IGFBP7的表达 | 第108页 |
| 4.3.3 干细胞膜片的培养 | 第108页 |
| 4.3.4 SD大鼠胫骨骨不连模型的构建 | 第108-110页 |
| 4.3.5 X线检测 | 第110页 |
| 4.3.6 Mirco-CT扫描 | 第110页 |
| 4.3.7 标本脱钙 | 第110页 |
| 4.3.8 HE染色 | 第110-111页 |
| 4.3.9 Masson三色染色 | 第111页 |
| 4.3.10 番红O固绿染色 | 第111页 |
| 4.3.11 免疫组化 | 第111-112页 |
| 4.3.12 统计学分析 | 第112-113页 |
| 4.4 实验结果 | 第113-121页 |
| 4.4.1 术后8周,胫骨标本X线检测结果 | 第113页 |
| 4.4.2 大鼠胫骨骨不连8周后,CT检测愈合情况 | 第113-116页 |
| 4.4.3 切片组织学评估骨缺损愈合情况 | 第116-118页 |
| 4.4.4 免疫组化染色 | 第118-121页 |
| 4.5 讨论 | 第121-123页 |
| 4.6 结论 | 第123-124页 |
| 4.7 参考文献 | 第124-128页 |
| 综述 | 第128-149页 |
| 参考文献 | 第140-149页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第149-151页 |
