| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 油菜的生产现状与育种研究 | 第10-11页 |
| 1.1.1 油菜的生产现状 | 第10页 |
| 1.1.2 油菜的育种研究 | 第10-11页 |
| 1.2 油菜的转基因技术及在育种上的应用 | 第11-14页 |
| 1.3 Dof转录因子 | 第14-17页 |
| 1.3.1 Dof蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 Dof蛋白的功能 | 第15-17页 |
| 1.3.2.1 组织分化 | 第15-16页 |
| 1.3.2.2 代谢调节 | 第16页 |
| 1.3.2.3 种子发育 | 第16-17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 过表达GmDof4和GmDof11转基因油菜的获得 | 第18-32页 |
| 2.1 试验材料、试剂和仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 子叶法转化甘蓝型油菜 | 第19-20页 |
| 2.2.2 筛选剂Kan浓度的确定 | 第20页 |
| 2.2.3 子叶法转化效率统计 | 第20页 |
| 2.2.4 甘蓝型油菜35S:GmDof4、35S:GmDof11阳性转基因植株鉴定 | 第20-22页 |
| 2.2.4.1 PCR鉴定T_0代转基因植株 | 第21页 |
| 2.2.4.2 半定量RT-PCR检测转基因植株表达量 | 第21-22页 |
| 2.2.5 GmDof4、GmDof11蛋白的亚细胞定位 | 第22-24页 |
| 2.2.5.1 GmDof4、GmDof11序列的克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.5.2 亚细胞定位载体的构建与转化 | 第23页 |
| 2.2.5.3 农杆菌转化 | 第23-24页 |
| 2.2.5.4 GmDof4、GmDof11蛋白的亚细胞定位 | 第24页 |
| 2.3 试验结果 | 第24-32页 |
| 2.3.1 子叶法转化甘蓝型油菜 | 第24-26页 |
| 2.3.1.1 “扬油6号”子叶外植体分化效率 | 第24-25页 |
| 2.3.1.2 Kan筛选剂浓度的确定 | 第25-26页 |
| 2.3.1.3 pCambia-1303载体转化甘蓝型油菜效果 | 第26页 |
| 2.3.2 35S:GmDof4、35S:GmDof11阳性转基因植株的获得及鉴定 | 第26-29页 |
| 2.3.2.1 35S:GmDof4、35S:GmDof11阳性转基因植株的获得 | 第27页 |
| 2.3.2.2 PCR鉴定转基因阳性苗 | 第27-28页 |
| 2.3.2.3 半定量RT-PCR鉴定转基因苗 | 第28-29页 |
| 2.3.3 GmDof4、GmDof11蛋白的亚细胞定位 | 第29-32页 |
| 2.3.3.1 35S:GmDof4-GFP、35S:GmDof11-GFP表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3.2 GmDof4-GFP、GmDof11-GFP在烟草叶片中瞬时表达 | 第30-32页 |
| 第三章 转基因油菜的种子品质分析 | 第32-38页 |
| 3.1 试验材料、试剂和仪器 | 第32页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 仪器 | 第32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 NIRS法测定T_2代转基因油菜种子营养成分 | 第32-33页 |
| 3.2.2 GC法测定T_2代转基因株系种子油脂中脂肪酸组分的含量 | 第33页 |
| 3.2.2.1 三酰甘油的提取 | 第33页 |
| 3.2.2.2 三酰甘油的水解以及脂肪酸酯化 | 第33页 |
| 3.2.2.3 脂肪酸的定性和定量分析 | 第33页 |
| 3.2.3 T_2代转基因株系种子直径及千粒重检测 | 第33-34页 |
| 3.3 试验结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 Y6和各转基因株系油菜种子品质分析 | 第34页 |
| 3.3.2 转基因株系种子油脂中脂肪酸组分的含量 | 第34-36页 |
| 3.3.2.1 NRIS法测定各株系种子中粗脂肪酸含量 | 第34-35页 |
| 3.3.2.2 GC测定各株系种子中脂肪酸含量 | 第35-36页 |
| 3.3.3 T_2代转基因株系种子直径和千粒重 | 第36-38页 |
| 第四章 GmDof4和GmDof11转录因子调控甘蓝型油菜中与油脂合成相关基因的表达 | 第38-45页 |
| 4.1 材料、试剂与仪器 | 第39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第39页 |
| 4.2 试验方法 | 第39-43页 |
| 4.2.1 qPCR检测基因表达 | 第39-40页 |
| 4.2.2 酵母单杂交鉴定GmDof直接靶基因 | 第40-43页 |
| 4.2.2.1 “猎物”重组载体构建 | 第40-42页 |
| 4.2.2.2 酵母细胞转化 | 第42页 |
| 4.2.2.3 转录因子与DNA互作验证 | 第42-43页 |
| 4.3 试验结果 | 第43-45页 |
| 4.3.1 qPCR分析结果 | 第43页 |
| 4.3.2 酵母单杂交鉴定结果 | 第43-45页 |
| 第五章 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
| 1. 甘蓝型油菜遗传转化培养基配方 | 第52-54页 |
| 2. 本研究用到的载体示意图 | 第54页 |
| 3. T_1代转基苗的PCR鉴定结果 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及申请专利 | 第56-57页 |
