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对华北大黑鳃金龟幼虫具有活性的苏云金芽胞杆菌筛选与鉴定

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
英文缩略表第13-14页
第一章 引言第14-28页
    1.1 苏云金芽胞杆菌概述第14-15页
    1.2 苏云金芽胞杆菌毒素命名与分类第15-16页
    1.3 杀虫晶体蛋白结构与功能以及作用机制第16-21页
        1.3.1 Cry毒素(d-endotoxin)第17-20页
        1.3.2 Cyt毒素第20-21页
    1.4 BT杀虫基因鉴定方法第21-25页
        1.4.1 构建DNA文库鉴定第21-22页
        1.4.2 以PCR为基础的方法第22-24页
        1.4.3 基因组测序第24页
        1.4.4 分子杂交和基因芯片鉴定第24-25页
    1.5 蛴螬及其危害第25-26页
        1.5.1 蛴螬的危害第25页
        1.5.2 大黑鳃金龟及其防治第25-26页
    1.6 苏云金芽胞杆菌的应用第26-27页
        1.6.1 Bt杀虫剂第26页
        1.6.2 转Bt基因植物第26-27页
    1.7 本研究的立题依据和目的意义第27-28页
第二章 材料与方法第28-37页
    2.1 实验材料与试剂第28-30页
        2.1.1 菌株和质粒第28页
        2.1.2 培养基第28页
        2.1.3 抗生素第28页
        2.1.4 酶与生化试剂第28-29页
        2.1.5 常用溶液与缓冲液第29-30页
        2.1.6 供试昆虫第30页
        2.1.7 仪器设备第30页
    2.2 实验方法第30-37页
        2.2.1 Bt菌株生物活性的测定第30页
        2.2.2 Bt基因组DNA的提取第30-31页
        2.2.3 PCR扩增(多样性分析)第31页
        2.2.4 酶切反应(RFLP-PCR分析)第31-32页
        2.2.5 菌株晶体的形态观察第32页
        2.2.6 杀虫晶体蛋白的分析第32页
        2.2.7 杀虫晶体蛋白基因的鉴定第32-33页
        2.2.8 Bt蛋白的提取第33-34页
        2.2.9 分泌蛋白的浓缩第34页
        2.2.10 DNA回收第34页
        2.2.11 DNA片段的连接第34页
        2.2.12大肠杆菌感受态的制备与转化第34页
        2.2.13琼脂颗粒的制备第34-35页
        2.2.14华北大黑鳃金龟幼虫的室内饲养第35页
        2.2.15琼脂体系中华北大黑鳃金龟幼虫的饲养与生物活性测定方法第35页
        2.2.16华北大黑鳃金龟幼虫中肠切片观察第35页
        2.2.17饲喂Bt后华北大黑鳃金龟幼虫肠道微生物观察第35-37页
第三章 结果与讨论第37-57页
    3.1 结果与分析第37-54页
        3.1.1 对蛴螬有活性的菌株筛选第37-38页
        3.1.2 Bt菌株多样性分析第38-40页
        3.1.3 Bt菌株晶体形态观察第40-42页
        3.1.4 Bt菌株杀虫晶体蛋白的SDS-PAGE分析第42-43页
        3.1.5 Bt菌株基因型的初步分析第43-44页
        3.1.6 Bt菌株杀虫蛋白基因型的初步分析第44-45页
        3.1.7 Bt菌株杀虫蛋白质谱鉴定第45-46页
        3.1.8 华北大黑鳃金龟幼虫室内饲养第46-47页
        3.1.9 琼脂体系中华北大黑鳃金龟幼虫的饲养第47-48页
        3.1.10菌株杀虫活性分析第48-49页
        3.1.11中肠病理切片观察第49-53页
        3.1.12饲喂Bt后华北大黑鳃金龟幼虫肠道微生物的观察第53-54页
    3.2 讨论第54-57页
全文结论第57-58页
参考文献第58-67页
致谢第67-69页
作者简历第69页

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