水貂阿留申病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用
| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第16-21页 |
| 1.1 水貂阿留申病毒概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 ADV的分类 | 第16页 |
| 1.1.2 形态结构与理化性质 | 第16页 |
| 1.1.3 ADV的致病机理 | 第16-17页 |
| 1.1.4 ADV的流行病学 | 第17页 |
| 1.1.5 ADV的防治 | 第17页 |
| 1.1.6 ADV的体外培养 | 第17-18页 |
| 1.2 ADV的分子生物学特性 | 第18-19页 |
| 1.2.1 基因组结构 | 第18页 |
| 1.2.2 基因的复制、转录与表达 | 第18页 |
| 1.2.3 基因组编码蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3 AD诊断方法的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.1 病原学诊断 | 第19页 |
| 1.3.2 血清学诊断 | 第19-20页 |
| 1.3.3 分子生物学诊断 | 第20页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 ADV的分离与鉴定 | 第21-26页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 细胞与实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 样品处理 | 第21页 |
| 2.2.2 病毒DNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 PCR方法检测ADV | 第21-22页 |
| 2.2.4 病毒分离培养 | 第22页 |
| 2.2.5 电镜观察 | 第22页 |
| 2.2.6 小鼠感染试验 | 第22页 |
| 2.3 结果 | 第22-25页 |
| 2.3.1 PCR检测结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 病毒分离与电镜观察结果 | 第23-24页 |
| 2.3.3 小鼠感染试验结果 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 ADV-HRB毒株全序列测定与分析 | 第26-30页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-28页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 3.2.2 片段扩增 | 第27页 |
| 3.2.3 克隆测序 | 第27页 |
| 3.2.4 比对分析 | 第27-28页 |
| 3.3 结果 | 第28-29页 |
| 3.3.1 片段扩增 | 第28页 |
| 3.3.2 比对分析 | 第28-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 ADV重组VP2蛋白的原核表达与鉴定 | 第30-36页 |
| 4.1 材料 | 第30页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第30页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第30页 |
| 4.2 方法 | 第30-32页 |
| 4.2.1 重组表达菌构建 | 第30页 |
| 4.2.2 重组蛋白诱导表达 | 第30页 |
| 4.2.3 重组蛋白SDS-PAGE电泳鉴定 | 第30-31页 |
| 4.2.4 重组蛋白纯化 | 第31页 |
| 4.2.5 重组蛋白复性 | 第31页 |
| 4.2.6 重组蛋白Western Blot鉴定 | 第31-32页 |
| 4.3 结果 | 第32-34页 |
| 4.3.1 重组蛋白表达 | 第32页 |
| 4.3.2 重组蛋白纯化 | 第32-33页 |
| 4.3.3 重组蛋白复性 | 第33-34页 |
| 4.3.4 重组蛋白Western Blot鉴定 | 第34页 |
| 4.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第五章 ADV单克隆抗体与兔源多克隆抗体的制备 | 第36-44页 |
| 5.1 材料 | 第36页 |
| 5.1.1 病毒、细胞与实验动物 | 第36页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 5.2 方法 | 第36-40页 |
| 5.2.1 动物免疫 | 第36-37页 |
| 5.2.2 细胞融合 | 第37页 |
| 5.2.3 杂交瘤细胞筛选 | 第37页 |
| 5.2.4 杂交瘤细胞亚型鉴定 | 第37-38页 |
| 5.2.5 IFA检测抗体 | 第38页 |
| 5.2.6 腹水制备与纯化 | 第38-39页 |
| 5.2.7 抗体效价的测定 | 第39页 |
| 5.2.8 抗原表位的鉴定 | 第39-40页 |
| 5.3 结果 | 第40-43页 |
| 5.3.1 单抗亚型 | 第40页 |
| 5.3.2 IFA检测抗体 | 第40-41页 |
| 5.3.3 腹水纯化 | 第41页 |
| 5.3.4 抗体效价 | 第41页 |
| 5.3.5 表位鉴定 | 第41-43页 |
| 5.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第六章 ADV双抗体夹心ELSIA检测方法的建立 | 第44-49页 |
| 6.1 材料 | 第44页 |
| 6.1.1 病毒与样品来源 | 第44页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 6.2 方法 | 第44-46页 |
| 6.2.1 抗体工作浓度的确定 | 第44页 |
| 6.2.2 反应条件的优化 | 第44-45页 |
| 6.2.3 判定标准的确定 | 第45页 |
| 6.2.4 特异性试验 | 第45页 |
| 6.2.5 敏感性试验 | 第45页 |
| 6.2.6 重复性试验 | 第45页 |
| 6.2.7 符合率试验 | 第45-46页 |
| 6.3 结果 | 第46-47页 |
| 6.3.1 抗体最佳工作浓度 | 第46页 |
| 6.3.2 最佳反应条件 | 第46页 |
| 6.3.3 判定标准 | 第46页 |
| 6.3.4 特异性 | 第46-47页 |
| 6.3.5 敏感性 | 第47页 |
| 6.3.6 稳定性 | 第47页 |
| 6.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第七章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
