| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-26页 |
| 1.1 植物源农药 | 第17-18页 |
| 1.1.1 植物源农药主要活性成分及杀虫活性 | 第17页 |
| 1.1.2 植物源农药的作用机制及开发应用 | 第17-18页 |
| 1.2 植物活性成分喜树碱的研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2.1 CPT的作用靶标 | 第18页 |
| 1.2.2 CPT的医用价值 | 第18-19页 |
| 1.2.3 CPT的农用价值 | 第19-20页 |
| 1.2.4 喜树碱衍生物的农用活性研究 | 第20页 |
| 1.3 Top I结构与功能的关系 | 第20-23页 |
| 1.3.1 拓扑异构酶分类 | 第20-21页 |
| 1.3.2 Top I的结构与催化活性 | 第21-22页 |
| 1.3.3 Top I氨基酸多型性与其功能的关系 | 第22-23页 |
| 1.3.4 Top I定点突变对其活性的改变 | 第23页 |
| 1.4 Top I抑制剂研究 | 第23-24页 |
| 1.5 论文设计思路 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究目的及研究意义 | 第24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 甜菜夜蛾Top I定点突变 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 化学试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 宿主菌 | 第27页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 PCR扩增目的片段 | 第28-29页 |
| 2.2.2 目的片段的回收纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.3 非突变型质粒模板降解 | 第30页 |
| 2.2.4 克隆目的基因 | 第30页 |
| 2.2.5 阳性克隆筛选 | 第30页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.2.7 克隆载体双酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.8 目的蛋白诱导表达 | 第31页 |
| 2.2.9 目的蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.10 目的蛋白质裂解 | 第32页 |
| 2.2.11 目的蛋白质纯化 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-37页 |
| 2.3.1 目的基因扩增 | 第33页 |
| 2.3.2 菌液PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 双酶切鉴定及测序 | 第34-35页 |
| 2.3.4 目的蛋白诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.3.5 目的蛋白分离纯化 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 Top I氨基酸多型性对钾离子亲和性及解旋活性的影响 | 第38-47页 |
| 3.1 实验材料及方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.2 化学试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 蛋白含量的测定 | 第39页 |
| 3.2.2 Top I酶活性测定 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 Top I氨基酸多型性对盐离子亲和性的影响 | 第40-43页 |
| 3.3.2 重组菌株裂解液上清解旋活性的比较 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Top I氨基酸多型性对其解旋酶活性的影响 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 Top I氨基酸多型性对CPT及其衍生物敏感性的影响 | 第47-56页 |
| 4.1 实验材料及方法 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.2 化学试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-54页 |
| 4.3.1 Top I氨基酸多型性对CPT敏感性的影响 | 第48-50页 |
| 4.3.2 Top I氨基酸多型性对HCPT敏感性的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.3 Top I氨基酸多型性对IRT敏感性的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.4 Top I氨基酸多型性对TPT敏感性的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 Top I氨基酸多型性对CPT/HCPT敏感性的时间效应 | 第56-64页 |
| 5.1 实验材料及方法 | 第56-57页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第56页 |
| 5.1.2 化学试剂 | 第56页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57页 |
| 5.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 5.3.1 Top I对CPT与HCPT敏感性的时间效应 | 第57-58页 |
| 5.3.2 L530P对CPT与HCPT敏感性的时间效应 | 第58-59页 |
| 5.3.3 A653T对CPT与HCPT敏感性的时间效应 | 第59-60页 |
| 5.3.4 S729T对CPT与HCPT敏感性的时间效应 | 第60-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-64页 |
| 第六章 Top I氨基酸多型性对10-羟基喜树碱氯乙基异氰酸酯取代物敏感性的影响 | 第64-70页 |
| 6.1 实验材料及方法 | 第64-65页 |
| 6.1.1 实验仪器 | 第64页 |
| 6.1.2 化学试剂 | 第64页 |
| 6.1.3 试剂配制 | 第64-65页 |
| 6.2 实验方法 | 第65页 |
| 6.3 实验结果 | 第65-68页 |
| 6.3.1 Top I对10-羟基喜树碱氯乙基异氰酸酯取代物敏感性的影响 | 第65-66页 |
| 6.3.2 L530P对10-羟基喜树碱氯乙基异氰酸酯取代物敏感性的影响 | 第66-67页 |
| 6.3.3 A653T对10-羟基喜树碱氯乙基异氰酸酯取代物敏感性的影响 | 第67-68页 |
| 6.3.4 S729T对10-羟基喜树碱氯乙基异氰酸酯取代物敏感性的影响 | 第68页 |
| 6.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第七章 Top I抑制剂筛选 | 第70-75页 |
| 7.1 实验材料及方法 | 第70-71页 |
| 7.1.1 实验仪器 | 第70页 |
| 7.1.2 化学试剂 | 第70页 |
| 7.1.3 试剂配制 | 第70-71页 |
| 7.2 实验方法 | 第71页 |
| 7.3 实验结果 | 第71-73页 |
| 7.4 讨论 | 第73-75页 |
| 第八章 全文结论 | 第75-76页 |
| 8.1 总结 | 第75页 |
| 8.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83页 |
