| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 常用缩写词 | 第9-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-40页 |
| 1.1 人乳头瘤病毒 | 第18-25页 |
| 1.1.1 乳头瘤病毒系统进化史 | 第18-20页 |
| 1.1.2 人乳头瘤病毒结构与功能 | 第20-24页 |
| 1.1.3 人乳头瘤病毒生活周期史 | 第24-25页 |
| 1.2 人乳头瘤病毒与肿瘤 | 第25-30页 |
| 1.2.1 HPV与宫颈癌 | 第26-28页 |
| 1.2.2 HPV与食管癌 | 第28-30页 |
| 1.2.3 HPV与头颈部癌 | 第30页 |
| 1.3 人乳头瘤病毒的致癌机制 | 第30-34页 |
| 1.3.1 HPV病毒基因组整合机制 | 第30-31页 |
| 1.3.2 HPV相关免疫学机制 | 第31-32页 |
| 1.3.3 HPV与端粒酶机制 | 第32-33页 |
| 1.3.4 HPV相关细胞信号通路 | 第33-34页 |
| 1.4 HPV疫苗研究进展 | 第34-35页 |
| 1.5 HPV E5研究概述 | 第35-37页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第37-40页 |
| 第2章 中国唐山地区食管癌样本中HPV18 E5的存在情况 | 第40-54页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 实验材料 | 第41页 |
| 2.2.1 标本来源 | 第41页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第41页 |
| 2.2.3 实验仪器及软件 | 第41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.3.1 系统进化分析 | 第41-42页 |
| 2.3.2 食管癌样本中HPV基因的检测 | 第42-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-53页 |
| 2.4.1 E5系统进化分析 | 第43-46页 |
| 2.4.2 HPV基因存在情况 | 第46-53页 |
| 2.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第3章 HPV18 E5对细胞增殖及周期的影响 | 第54-72页 |
| 3.1 引言 | 第54-55页 |
| 3.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.2.1 细胞系 | 第55页 |
| 3.2.2 菌株与质粒 | 第55页 |
| 3.2.3 试剂、抗体与工具酶 | 第55-56页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-64页 |
| 3.3.1 细胞培养实验技术 | 第56-58页 |
| 3.3.2 pSecTag-HPV18E5真核表达质粒的构建 | 第58-60页 |
| 3.3.3 重组质粒的转染、阳性细胞株的筛选及鉴定 | 第60-63页 |
| 3.3.4 CCK-8 检测HPV18 E5对细胞增殖的影响 | 第63页 |
| 3.3.5 流式细胞术检测HPV18 E5对细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第64-70页 |
| 3.4.1 pSecTag-HPV18E5重组质粒的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 3.4.2 重组质粒在Balb/c 3T3细胞中表达的鉴定 | 第65-68页 |
| 3.4.3 HPV18 E5对细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| 3.4.4 HPV18 E5对细胞周期的影响 | 第69-70页 |
| 3.5 本章小结 | 第70-72页 |
| 第4章 HPV18 E5诱导Balb/c 3T3细胞恶性转化的研究 | 第72-90页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料 | 第73页 |
| 4.2.1 细胞与实验动物 | 第73页 |
| 4.2.2 试剂 | 第73页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-79页 |
| 4.3.1 pAd-E5腺病毒的包装 | 第73-77页 |
| 4.3.2 细胞转化实验 | 第77页 |
| 4.3.3 软琼脂克隆实验 | 第77-78页 |
| 4.3.4 细胞划痕实验 | 第78页 |
| 4.3.5 细胞侵袭实验 | 第78-79页 |
| 4.3.6 SCID小鼠致瘤实验 | 第79页 |
| 4.3.7 统计分析 | 第79页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第79-88页 |
| 4.4.1 重组腺病毒的构建 | 第79-83页 |
| 4.4.2 二阶段细胞转化实验分析HPV18 E5致癌性 | 第83-84页 |
| 4.4.3 软琼脂克隆形成实验 | 第84-85页 |
| 4.4.4 细胞迁移性分析 | 第85-86页 |
| 4.4.5 细胞侵袭性分析 | 第86页 |
| 4.4.6 SCID小鼠致瘤实验 | 第86-88页 |
| 4.5 本章小结 | 第88-90页 |
| 第5章 HPV18 E5对EGFR细胞信号通路的影响 | 第90-100页 |
| 5.1 引言 | 第90-91页 |
| 5.2 实验材料 | 第91-92页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第91页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第91页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第91-92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92-93页 |
| 5.3.1 RNA提取 | 第92页 |
| 5.3.2 Real-time PCR | 第92-93页 |
| 5.3.3 BCA法测定总蛋白含量 | 第93页 |
| 5.3.4 Western blot检测 | 第93页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第93-98页 |
| 5.4.1 Real-time PCR结果 | 第93-96页 |
| 5.4.2 总蛋白含量测定 | 第96页 |
| 5.4.3 Western blot检测结果 | 第96-98页 |
| 5.5 本章小结 | 第98-100页 |
| 结论 | 第100-102页 |
| 参考 文献 | 第102-114页 |
| 附录 | 第114-122页 |
| 攻读博士学位期间所发表的学术论文 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
