| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 新型基因编辑技术及其在家畜转基因中的应用 | 第14-42页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 锌指核酸酶（Zinc finger nucleases，ZFNs)介导的基因编辑技术 | 第15-18页 |
| 转录激活子样效应因子核酸酶（Transcription-activator-like effectornucleases, TALENs)介导的基因编辑技术 | 第18-22页 |
| CRISPR-Cas系统介导的基因编辑技术 | 第22-27页 |
| 新型基因编辑技术在家畜转基因中的应用 | 第27-30页 |
| 结语 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-42页 |
| 第二部分 实验研究 | 第42-57页 |
| 第一章 脂质体介导小鼠胚胎干细胞转染条件的优化 | 第42-57页 |
| 前言 | 第42-43页 |
| 1. 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1. 主要实验仪器 | 第43页 |
| 1.2. 主要试剂 | 第43-44页 |
| 1.3. 试剂配制 | 第44页 |
| 1.4. 质粒、菌种及细胞 | 第44页 |
| 2. 实验方法 | 第44-50页 |
| 2.1. 表达红色荧光蛋白对照质粒pRFP-N1的构建 | 第44-46页 |
| 2.2. 小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stem cells,mESCs)的培养及传代 | 第46-48页 |
| 2.3. 脂质体介导R1小鼠胚胎干细胞转染条件的优化 | 第48-50页 |
| 3. 实验结果 | 第50-55页 |
| 3.1. 红色荧光蛋白表达质粒pRFP-N1的构建结果 | 第50-52页 |
| 3.2. 小鼠胚胎干细胞的培养及传代结果 | 第52-53页 |
| 3.3. 脂质体介导R1小鼠胚胎干细胞转染条件的优化结果 | 第53-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-57页 |
| 第二章 ZFNs介导小鼠胚胎干细胞的基因定点修饰 | 第57-76页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 1. 实验材料 | 第58-59页 |
| 1.1. 实验仪器 | 第58页 |
| 1.2. 主要试剂 | 第58-59页 |
| 1.3. 试剂配制 | 第59页 |
| 1.4. 实验动物 | 第59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-64页 |
| 2.1. 锌指核酸酶表达质粒(pZFN1和pZFN2)对R1 mmES细胞的转染及检测 | 第59-62页 |
| 2.2. 发生MSTN基因突变的R1 mES细胞的鉴定 | 第62-63页 |
| 2.3. 嵌合体小鼠的获得 | 第63-64页 |
| 3. 实验结果 | 第64-74页 |
| 3.1. 锌指核酸酶表达质粒(pZFN1和pZFN2)对R1 mES细胞的转染及检测结果 | 第64-69页 |
| 3.2. MSTN基因突变的R1 mES细胞的鉴定结果 | 第69-74页 |
| 4. 讨论 | 第74-76页 |
| 第三章 ZFNs MRNA显微注射介导的MSTN纯合敲除小鼠的获得与检测 | 第76-103页 |
| 前言 | 第76-77页 |
| 1. 实验材料 | 第77-79页 |
| 1.1. 实验仪器 | 第77页 |
| 1.2. 主要试剂 | 第77-78页 |
| 1.3. 试剂配制 | 第78-79页 |
| 1.4. 实验动物 | 第79页 |
| 2. 实验方法 | 第79-85页 |
| 2.1. 锌指核酸酶表达质粒的体外转录 | 第79-80页 |
| 2.2. 锌指核酸酶mRNA的受精卵胞质注射及胚胎移植 | 第80-82页 |
| 2.3. 基因敲除小鼠的敲除型鉴定与纯合繁育 | 第82-83页 |
| 2.4. MSTN基因纯合敲除小鼠的相关检测 | 第83-85页 |
| 3. 实验结果 | 第85-96页 |
| 3.1. 锌指核酸酶表达质粒的体外转录结果 | 第85-86页 |
| 3.2. 锌指核酸酶mRNA的受精卵胞质注射及胚胎移植结果 | 第86-87页 |
| 3.3. 基因敲除小鼠的敲除型鉴定与纯合繁育结果 | 第87-91页 |
| 3.4. MSTN基因纯合敲除小鼠的相关检测结果 | 第91-96页 |
| 4. 讨论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-103页 |
| 结论 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 攻读学位期间的论文发表及获得专利情况 | 第106-107页 |
