| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第14-24页 |
| 第一章 副黏病毒V蛋白拮抗干扰素的研究进展 | 第14-24页 |
| 1.1 新城疫的概述 | 第14-15页 |
| 1.2 新城疫病毒 | 第15-17页 |
| 1.2.1 NDV的结构 | 第15页 |
| 1.2.2 NDV的分型 | 第15-16页 |
| 1.2.3 NDV的基因组 | 第16-17页 |
| 1.3 副黏病毒拮抗干扰素的研究进展 | 第17-23页 |
| 1.3.1 副黏病毒的P基因 | 第17-19页 |
| 1.3.2 Ⅰ型IFN系统 | 第19-20页 |
| 1.3.3 副黏病毒拮抗IFN的细胞目标 | 第20-22页 |
| 1.3.4 副黏病毒阻断干扰素Jak/STAT信号通路 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-64页 |
| 第二章CTD区锌指结构氨基酸对NDV V蛋白与MDA5 互作抑制IFN-β 生成的影响 11 | 第24-39页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1 质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 细胞 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 副黏病毒V蛋白CTD区的序列分析 | 第24页 |
| 2.2.2 点突变引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.3 重组质粒pCMV-3HA- H/C1~C7 的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.4 ChMDA5 真核表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.2.5 Western blotting检测目的蛋白的表达 | 第26-27页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因系统检测IFN-β 启动子活性 | 第27-28页 |
| 2.2.7 Real time PCR测定IFN-β mRNA水平 | 第28页 |
| 2.2.8 ELISA测定IFN-β 蛋白水平 | 第28页 |
| 2.2.9 免疫共沉淀试验验证V蛋白突变体与MDA5 的相互作用 | 第28-29页 |
| 2.2.10 多个氨基酸突变的影响 | 第29-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-37页 |
| 2.3.1 副黏病毒V蛋白CTD区的序列比对结果 | 第30-31页 |
| 2.3.2 重组质粒pCMV-3HA-H/C1~C7 的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3 ChMDA5 真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.4 V蛋白及突变体表达的检测 | 第33页 |
| 2.3.5 IFN-β 启动子活性检测 | 第33-34页 |
| 2.3.6 IFN-β mRNA检测 | 第34-35页 |
| 2.3.7 IFN-β 蛋白检测 | 第35-36页 |
| 2.3.8 V蛋白及V蛋白突变体与MDA5 相互作用检测 | 第36页 |
| 2.3.9 多个氨基酸突变对V蛋白功能的影响 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章CTD区其他保守氨基酸对NDV V蛋白与MDA5 互作抑制IFN-β生成的影响 | 第39-53页 |
| 3.1 材料 | 第39页 |
| 3.1.1 质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 细胞 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 副黏病毒V蛋白CTD区的序列分析 | 第39页 |
| 3.2.2 点突变引物设计 | 第39-41页 |
| 3.2.3 重组质粒pCMV-3HA-△V的构建 | 第41页 |
| 3.2.4 Western blotting检测V蛋白突变体表达 | 第41页 |
| 3.2.5 双荧光素酶报告基因检测IFN-β 启动子活性 | 第41-42页 |
| 3.2.6 real time PCR测定IFN-β mRNA水平 | 第42页 |
| 3.2.7 ELISA测定IFN-β 蛋白水平 | 第42页 |
| 3.2.8 免疫共沉淀试验验证V蛋白突变体与MDA5 的相互作用 | 第42-44页 |
| 3.2.9 几个重要氨基酸的确定 | 第44页 |
| 3.3 结果 | 第44-50页 |
| 3.3.1 重组质粒pCMV-3HA-△V的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 V蛋白突变体表达的检测 | 第45-46页 |
| 3.3.3 IFN-β 启动子活性检测 | 第46-47页 |
| 3.3.4 IFN-β mRNA检测 | 第47页 |
| 3.3.5 IFN-β 蛋白检测 | 第47-48页 |
| 3.3.6 V蛋白及V蛋白突变体与MDA5 相互作用检测 | 第48-49页 |
| 3.3.7 R178 和E180 对V蛋白的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 新城疫病毒V蛋白N端氨基酸对V蛋白与MDA5 相互作用抑制IFN-β生成的影响 | 第53-64页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 质粒 | 第53页 |
| 4.1.2 细胞 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 不同NDV V蛋白的序列分析 | 第53-54页 |
| 4.2.2 点突变引物设计 | 第54页 |
| 4.2.3 重组质粒pCMV-3HA-△V的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.4 Western blotting检测V蛋白突变体的表达 | 第55-56页 |
| 4.2.5 双荧光素酶报告基因检测IFN-β 启动子活性 | 第56页 |
| 4.2.6 real time PCR测定IFN-β mRNA水平 | 第56页 |
| 4.2.7 ELISA测定IFN-β 蛋白水平 | 第56-57页 |
| 4.2.8 免疫共沉淀试验验证V蛋白突变体与MDA5 的相互作用 | 第57-58页 |
| 4.3 结果 | 第58-62页 |
| 4.3.1 重组质粒pCMV-3HA-△V的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.2 V蛋白突变体表达的检测 | 第59-60页 |
| 4.3.3 IFN-β 启动子活性检测 | 第60页 |
| 4.3.4 IFN-β mRNA检测 | 第60-61页 |
| 4.3.5 IFN-β 蛋白检测 | 第61-62页 |
| 4.3.6 V蛋白N端突变体与MDA5 相互作用检测 | 第62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 4.5 小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 本论文的创新点 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 附录 | 第77-81页 |
| 缩略词表 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84-85页 |
