| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 综述 | 第11-21页 |
| 1.1 猕猴桃溃疡病菌研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 丁香假单胞菌致病毒素的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 丁香霉素（Syringomycin） | 第14-15页 |
| 1.2.2 冠菌素（coronatine ） | 第15-16页 |
| 1.2.3 菜豆毒素(Phaselotoxin) | 第16-17页 |
| 1.2.4 烟草野火菌毒素 ( tabtoxin) | 第17-18页 |
| 1.3 GacA/GacS双组份调控系统模型 | 第18-19页 |
| 1.4 革兰氏阴性细菌基因敲除系统 | 第19-21页 |
| 2 引言 | 第21-23页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-35页 |
| 3.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 3.1.2 实验所涉及引物 | 第24页 |
| 3.1.3 试验所用试剂 | 第24页 |
| 3.2 猕猴桃溃疡病菌gacA基因的克隆及序列分析 | 第24-27页 |
| 3.2.1 Psa基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 3.2.2 PCR反应体系及反应条件 | 第25-26页 |
| 3.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 3.2.4 重组质粒转化 | 第26-27页 |
| 3.2.5 序列分析 | 第27页 |
| 3.3 gacA基因突变菌株及互补菌株的构建 | 第27-32页 |
| 3.3.1 融合PCR方法 | 第27-29页 |
| 3.3.2 高保真Taq酶扩增产物末端加A | 第29页 |
| 3.3.3 PCR产物的纯化 | 第29页 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第29页 |
| 3.3.5 DNA酶切 | 第29-30页 |
| 3.3.6 DNA连接 | 第30页 |
| 3.3.7 连接产物的转化 | 第30-31页 |
| 3.3.8 大肠杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| 3.3.9 三亲结合试验 | 第31页 |
| 3.3.10 缺失突变菌株的筛选及验证 | 第31-32页 |
| 3.3.11 互补菌株的构建 | 第32页 |
| 3.4 猕猴桃溃疡病菌gacA基因的功能分析 | 第32-35页 |
| 3.4.1 致病性检测 | 第32-33页 |
| 3.4.2 过敏反应（HR)检测 | 第33页 |
| 3.4.3 胞外蛋白酶检测 | 第33页 |
| 3.4.4 胞外多糖的检测 | 第33页 |
| 3.4.5 游动性检测 | 第33-34页 |
| 3.4.6 大肠杆菌平板抑制试验 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-53页 |
| 4.1 猕猴桃溃疡病菌GacA蛋白生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 4.1.1 Psa基因组中gacA基因的克隆 | 第35-36页 |
| 4.1.2 Psa基因组中gacA基因的结构域分析 | 第36页 |
| 4.1.3 gacA基因在部分病原细菌的分布及相似性分析 | 第36-37页 |
| 4.2 Psa中gacA基因的功能研究 | 第37-43页 |
| 4.2.1 gacA基因融合片段的构建 | 第37-38页 |
| 4.2.2 重组质粒pK18gacA的构建 | 第38-39页 |
| 4.2.3 突变株的构建、筛选及验证 | 第39-41页 |
| 4.2.4 功能互补菌株的构建、筛选及验证 | 第41-43页 |
| 4.3 猕猴桃溃疡病菌gacA基因的功能分析 | 第43-53页 |
| 4.3.1 突变株对猕猴桃离体叶片致病性影响 | 第43-44页 |
| 4.3.2 突变株对猕猴桃活体枝条致病性影响 | 第44-45页 |
| 4.3.3 过敏反应检测 | 第45-46页 |
| 4.3.4 游动性检测 | 第46-48页 |
| 4.3.5 大肠杆菌平板抑制 | 第48-49页 |
| 4.3.6 胞外蛋白酶检测 | 第49-50页 |
| 4.3.7 胞外多糖检测 | 第50-53页 |
| 5 讨论 | 第53-55页 |
| 5.1 PSA中gacA基因生物信息学分析 | 第53页 |
| 5.2 引物设计 | 第53页 |
| 5.3 融合PCR技术应用 | 第53-54页 |
| 5.4 缺失突变体的构建 | 第54页 |
| 5.5 猕猴桃溃疡病菌中gacA基因具有调控作用 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录A | 第63-66页 |
| 1.1 实验涉及的抗生素 | 第63页 |
| 1.2 研究涉及的培养基 | 第63-64页 |
| 1.3 研究所用试剂及缓冲液 | 第64-65页 |
| 1.4 实验涉及的试剂盒 | 第65页 |
| 1.5 供试仪器 | 第65-66页 |
| 附录B | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
