| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 瓜类细菌性果斑病介绍 | 第10-15页 |
| 1.1.1 西甜瓜生产概况 | 第10页 |
| 1.1.2 西瓜嗜酸菌命名及生物学特性介绍 | 第10-11页 |
| 1.1.3 瓜类细菌性果斑病症状 | 第11页 |
| 1.1.4 瓜类细菌性果斑病的地理分布及寄主多样性 | 第11-12页 |
| 1.1.5 瓜类细菌性果斑病侵染循环 | 第12-13页 |
| 1.1.6 瓜类细菌性果斑病菌的遗传多样性 | 第13-14页 |
| 1.1.7 瓜类细菌性果斑病综合防治 | 第14-15页 |
| 1.2 植物病原细菌多耐药RND外排泵研究综述 | 第15-21页 |
| 1.2.1 RND外排泵家族的结构与功能 | 第15-18页 |
| 1.2.2 细菌RND外排泵与农作物的互作关系 | 第18-19页 |
| 1.2.3 外排泵抑制剂的开发 | 第19-21页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.4 技术路线 | 第22-23页 |
| 2 RND多耐药外排泵目的基因缺失突变菌株及互补菌株的筛选 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 菌株、质粒以及培养条件 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基配方 | 第23-25页 |
| 2.1.5 培养基中添加的抗生素 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 RND外排家族相关基因的选取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 扩增庆大霉素(Gm)的抗性基因 | 第26页 |
| 2.2.3 Acidovorax citrulli菌株Aac-5全基因组DNA制备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 RND外排家族相关基因及其左右臂的扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.5 目的片段的回收 | 第29页 |
| 2.2.6 质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.7 Aave_0319基因同源重组所需的自杀质粒载体构建 | 第30页 |
| 2.2.8 Aave_0387、Aave_0389、Aave_333-334、Aave_3885基因同源重组所需的自杀质粒载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.9 基因缺失突变菌株的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.10 RND外排家族相关基因(marC、nodT、hlyD、rpsL)缺失突变株及互补菌株的筛选以及验证 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆以及序列的分析 | 第33-34页 |
| 2.3.2 RND外排泵耐药家族相关基因的重组质粒正确性验证 | 第34-35页 |
| 2.3.3 RND外排泵耐药家族相关基因的缺失突变株的筛选及验证 | 第35-36页 |
| 2.3.4 对应的互补菌株的获得及验证 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-39页 |
| 3 RND多耐药外排家族相关基因的功能分析 | 第39-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 3.2 培养基配方 | 第39-40页 |
| 3.3 实验菌株 | 第40页 |
| 3.4 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.4.1 RND外排家族相关基因缺失突变株、互补株和野生株Aac-5抗生素及铜制剂耐受力对比 | 第40-41页 |
| 3.4.2 致病性的测定 | 第41-42页 |
| 3.4.3 胞外纤维素酶测定 | 第42页 |
| 3.4.4 烟草过敏性反应测定 | 第42页 |
| 3.4.5 游动能力测定 | 第42页 |
| 3.4.6 生物膜形成能力测定 | 第42-43页 |
| 3.4.7 生长曲线的测定 | 第43页 |
| 3.4.8 胞外多糖的测定 | 第43页 |
| 3.4.9 胞外蛋白酶的测定 | 第43页 |
| 3.4.10 环境压力的敏感性实验 | 第43-44页 |
| 3.5 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.5.1 RND外排家族相关基因缺失突变株、互补株和野生株Aac-5对抗生素及铜制剂的耐受力对比 | 第44-47页 |
| 3.5.2 致病性的测定 | 第47-49页 |
| 3.5.3 胞外纤维素酶测定 | 第49页 |
| 3.5.4 烟草过敏性反应测定 | 第49-50页 |
| 3.5.5 游动能力测定 | 第50页 |
| 3.5.6 生物膜形成情况测定 | 第50-51页 |
| 3.5.7 生长曲线的测定 | 第51页 |
| 3.5.8 胞外多糖(EPS)的测定 | 第51-52页 |
| 3.5.9 胞外蛋白酶的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.10 环境压力的敏感性实验 | 第53页 |
| 3.6 小结 | 第53-55页 |
| 4 RND多耐药外排泵相关基因突变菌株中指定基因相对表达量的分析 | 第55-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第55页 |
| 4.1.2 实验菌株 | 第55页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 供试菌株RNA的提取 | 第55-56页 |
| 4.2.2 反转录合成cDNA | 第56-57页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR测定相关基因的表达量 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 5 全文结论与讨论 | 第60-63页 |
| 5.1 结论 | 第60-61页 |
| 5.1.1 RND外排泵相关基因缺失突变体的构建 | 第60页 |
| 5.1.2 RND外排家族相关基因缺失突变株、互补株和野生株Aac-5对抗生素及铜制剂的耐受力对比 | 第60页 |
| 5.1.3 目的基因缺失突变菌株对致病力的影响 | 第60页 |
| 5.1.4 目的基因缺失突变菌株相关表型分析结果 | 第60页 |
| 5.1.5 不同环境压力下菌株生长情况分析结果 | 第60-61页 |
| 5.1.6 实时荧光定量测定RND外排泵相关基因表达量的结果 | 第61页 |
| 5.2 讨论 | 第61-63页 |
| 6 展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
