| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 纤维素概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 纤维素结构 | 第8-9页 |
| 1.1.2 纤维素的应用前景 | 第9页 |
| 1.1.3 纤维素的水解 | 第9-10页 |
| 1.2 纤维素酶 | 第10-13页 |
| 1.2.1 纤维素酶的分类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 纤维素酶的应用 | 第11页 |
| 1.2.3 纤维素酶作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2.4 纤维素酶的分子结构 | 第12-13页 |
| 1.3 毕赤酵母表达体系 | 第13-14页 |
| 1.4 灵芝内切葡聚糖酶的研究背景以及研究意义 | 第14-16页 |
| 1.4.1 本课题的研究背景 | 第15页 |
| 1.4.2 本课题研究意义 | 第15-16页 |
| 1.5 本课题主要研究内容及方法 | 第16-17页 |
| 1.5.1 本课题研究内容 | 第16页 |
| 1.5.2 本课题研究思路 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第17-20页 |
| 2.1.3 实验仪器与设备 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基及试剂溶液的配制 | 第20-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-37页 |
| 2.2.1 GlCel5A生物信息学搜集 | 第23-24页 |
| 2.2.2 pPICZαA-GlCel5A质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.3 pPICZαA-GlCel5A质粒的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.4 表达载体在毕赤酵母X33中的同源重组 | 第25-28页 |
| 2.2.5 GlCel5A在毕赤酵母中的表达 | 第28页 |
| 2.2.6 GlCel5A目的蛋白的纯化 | 第28-31页 |
| 2.2.7 GlCel5A的酶活测定 | 第31-33页 |
| 2.2.8 蛋白质结晶概论 | 第33-34页 |
| 2.2.9 蛋白结晶条件的初筛 | 第34-35页 |
| 2.2.10 蛋白结晶条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.2.11 GlCel5A蛋白晶体数据收集及结构解析 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-55页 |
| 3.1 GlCel5A生物学信息搜集 | 第37-40页 |
| 3.2 GlCel5A的构建与表达纯化 | 第40-44页 |
| 3.2.1 pPICZαA-GlCel5A质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.2 重组菌株阳性筛选及表达小试 | 第40-41页 |
| 3.2.3 内切葡聚糖酶GlCel5A的大规模表达与纯化 | 第41-44页 |
| 3.3 GlCel5A的酶学研究 | 第44-45页 |
| 3.4 GlCel5A的结晶 | 第45-47页 |
| 3.4.1 灵芝内切葡聚糖酶GlCel5A的结晶条件初筛 | 第45-47页 |
| 3.4.2 灵芝内切葡聚糖酶GlCel5A的结晶条件优化 | 第47页 |
| 3.5 GlCel5A的结构解析 | 第47-49页 |
| 3.5.1 GlCel5A蛋白晶体结构数据收集 | 第47-49页 |
| 3.5.2 GlCel5A蛋白晶体结构相角确定及结构修正 | 第49页 |
| 3.6 GlCel5A的结构及催化机理研究 | 第49-55页 |
| 3.6.1 GlCel5A的晶体结构 | 第49-51页 |
| 3.6.2 GlCel5A与TrCel5A的结构比较 | 第51-52页 |
| 3.6.3 GlCel5A的活性中心结构 | 第52-54页 |
| 3.6.4 GlCel5A的催化机理 | 第54-55页 |
| 主要结论与展望 | 第55-56页 |
| 主要结论 | 第55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
