| 摘要 | 第5-11页 |
| ABSTRACT | 第11-18页 |
| 第一章 绪论 | 第24-49页 |
| 1.1 乳状液 | 第24-26页 |
| 1.2 乳液PCR | 第26-34页 |
| 1.2.1 PCR发展史 | 第26-28页 |
| 1.2.2 乳液PCR的建立 | 第28-29页 |
| 1.2.3 乳液PCR的应用 | 第29-32页 |
| 1.2.4 乳液PCR的特性 | 第32-34页 |
| 1.3 适配子筛选中次级文库构建方法 | 第34-40页 |
| 1.3.1 DNA次级文库在适配子筛选中作用 | 第34-36页 |
| 1.3.2 次级文库构建方法 | 第36-39页 |
| 1.3.3 总结 | 第39-40页 |
| 1.4 p16基因甲基化检测 | 第40-44页 |
| 1.4.1 p16基因概述 | 第40页 |
| 1.4.2 甲基化检测方法 | 第40-44页 |
| 1.5 乙型肝炎病毒检测 | 第44-45页 |
| 1.5.1 乙肝现状 | 第44页 |
| 1.5.2 乙型肝炎病毒检测方法 | 第44-45页 |
| 1.6 本课题的研究思路 | 第45-49页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第45-46页 |
| 1.6.2 研究方法 | 第46页 |
| 1.6.3 试验设计 | 第46-48页 |
| 1.6.4 研究意义 | 第48-49页 |
| 第二章 建立和优化乳液不对称PCR高效构建随机ssDNA文库 | 第49-64页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第50-53页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第50页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第51-52页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第52-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 2.2.1 引物和随机ssDNA文库 | 第53页 |
| 2.2.2 乳液的制作 | 第53-54页 |
| 2.2.3 乳液不对称PCR | 第54-55页 |
| 2.2.4 常规不对称PCR | 第55页 |
| 2.2.5 破乳液回收PCR产物 | 第55-56页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化回收 | 第56页 |
| 2.2.7 磁珠纯化回收ssDNA | 第56页 |
| 2.2.8 变性聚丙烯酰胺胶电泳 | 第56-57页 |
| 2.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 2.3.1 乳液颗粒制备 | 第57-59页 |
| 2.3.2 乳液-不对称PCR与常规不对称PCR比较 | 第59-60页 |
| 2.3.3 乳液-不对称PCR优化 | 第60-61页 |
| 2.4 讨论 | 第61-64页 |
| 第三章 乳液单引物PCR构建次级ssDNA文库方法的建立及优化 | 第64-81页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第64-67页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第64-65页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第65页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第65-66页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第66-67页 |
| 3.2 实验方法 | 第67-73页 |
| 3.2.1 引物和随机ssDNA文库 | 第67-68页 |
| 3.2.2 乳液的制作 | 第68页 |
| 3.2.3 乳液PCR | 第68-69页 |
| 3.2.4 常规单引物PCR | 第69页 |
| 3.2.5 乳液单引物PCR | 第69-70页 |
| 3.2.6 破乳液回收PCR产物 | 第70-71页 |
| 3.2.7 PCR产物纯化回收 | 第71页 |
| 3.2.8 PCR产物分析 | 第71-73页 |
| 3.3 实验结果 | 第73-78页 |
| 3.3.1 乳液PCR扩增随机ssDNA文库 | 第73页 |
| 3.3.2 乳液单引物PCR与常规单引物PCR比较 | 第73-74页 |
| 3.3.3 乳液单引物PCR优化 | 第74-78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-81页 |
| 第四章 两步乳液PCR的建立及在结直肠癌患者p16基因甲基化检测中的初步应用 | 第81-102页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第82-86页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第82-83页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第83页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第83-85页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第85-86页 |
| 4.2 实验方法 | 第86-96页 |
| 4.2.1 标准人基因组DNA的CpG甲基转移酶修饰 | 第86-87页 |
| 4.2.2 血清中游离DNA纯化回收 | 第87页 |
| 4.2.3 DNA重亚硫酸盐转化及纯化回收 | 第87-90页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第90页 |
| 4.2.5 甲基化特异性PCR (MSP) | 第90页 |
| 4.2.6 琼脂糖电泳 | 第90-91页 |
| 4.2.7 目的条带胶回收纯化 | 第91-92页 |
| 4.2.8 质粒构建及鉴定 | 第92-94页 |
| 4.2.9 两步乳液PCR: | 第94-95页 |
| 4.2.10 乳液PCR和甲基化特异性PCR比较 | 第95页 |
| 4.2.11 两步乳液PCR和甲基化特异性PCR检测P16基因甲基化抗干扰力比较 | 第95页 |
| 4.2.12 临床标本检测率的比较 | 第95-96页 |
| 4.2.13 统计学方法 | 第96页 |
| 4.3 结果 | 第96-99页 |
| 4.3.1 P16甲基化质粒的测序结果 | 第96-97页 |
| 4.3.2 灵敏度对比较 | 第97-98页 |
| 4.3.3 抗干扰力比较 | 第98-99页 |
| 4.3.4 临床标本检测率的比较 | 第99页 |
| 4.4 讨论 | 第99-102页 |
| 第五章 两步乳液PCR检测乙型肝炎病毒核酸方法的建立及初步应用 | 第102-113页 |
| 5.1 实验仪器和材料 | 第103-105页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第103-104页 |
| 5.1.2 实验材料 | 第104页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第104-105页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第105页 |
| 5.2 实验方法 | 第105-110页 |
| 5.2.1 标本来源 | 第105页 |
| 5.2.2 核酸提取 | 第105-106页 |
| 5.2.3 荧光定量PCR | 第106页 |
| 5.2.4 ELISA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb | 第106-107页 |
| 5.2.5 普通PCR | 第107-108页 |
| 5.2.6 两步乳液PCR体系(图5.1) | 第108-109页 |
| 5.2.7 琼脂糖电泳 | 第109页 |
| 5.2.8 灵敏度分析 | 第109页 |
| 5.2.9 统计学方法 | 第109-110页 |
| 5.3 结果 | 第110-111页 |
| 5.3.1 普通PCR扩增与两步乳液PCR扩增对比 | 第110-111页 |
| 5.3.2 统计分析 | 第111页 |
| 5.4 讨论 | 第111-113页 |
| 第六章 结论与展望 | 第113-115页 |
| 6.1 结论 | 第113页 |
| 6.2 展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第131页 |
