| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 上篇 文献综述 | 第18-59页 |
| 1 植物病原真菌和卵菌的致病过程 | 第20-26页 |
| 1.1 植物病原真菌和卵菌的生活史和病害循环 | 第20-22页 |
| 1.2 以稻瘟病菌为例的植物病原真菌侵染机制 | 第22-24页 |
| 1.3 以疫霉菌为例的植物病原卵菌侵染机制 | 第24-26页 |
| 2 参与致病过程转录因子的功能鉴定 | 第26-34页 |
| 2.1 利用生物信息学系统鉴定转录因子 | 第26-29页 |
| 2.2 利用转录分析寻找致病相关转录因子 | 第29-30页 |
| 2.3 建立突变体库寻找调控致病过程的转录因子 | 第30-32页 |
| 2.4 获得突变体鉴定转录因子如何参与致病过程 | 第32-34页 |
| 3 转录因子参与致病过程的调控机制研究 | 第34-41页 |
| 3.1 bZIP转录因子 | 第35-37页 |
| 3.2 HSF转录因子 | 第37-38页 |
| 3.3 锌指结构转录因子 | 第38-40页 |
| 3.4 其他类型转录因子 | 第40-41页 |
| 4 转录因子调控机制的研究方法 | 第41-44页 |
| 4.1 转录因子的翻译后水平调控 | 第41-42页 |
| 4.2 转录因子靶标基因的鉴定 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-59页 |
| 下篇 研究内容 | 第59-174页 |
| 第一章 大豆疫霉热激转录因子HSF家族基因的鉴定及转录分析 | 第60-80页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 1.1 数据库信息和同源检索 | 第62-63页 |
| 1.2 多重序列比对和系统发育分析 | 第63页 |
| 1.3 供试菌株和大豆品种 | 第63页 |
| 1.4 大豆培疫霉的培养 | 第63-64页 |
| 1.5 大豆疫霉无性生活史各阶段和侵染阶段的样品制备 | 第64页 |
| 1.6 大豆疫霉在氧化压力下样品的制备 | 第64-65页 |
| 1.7 RNA提取和cDNA合成 | 第65页 |
| 1.8 SYBR green Real-time RT-PCR分析 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-74页 |
| 2.1 HSF候选基因的挖掘 | 第65-66页 |
| 2.2 疫霉菌HSFs系统发育分析 | 第66-67页 |
| 2.3 HSF候选编码基因在基因组中的结构特征 | 第67-70页 |
| 2.4 大豆疫霉HSF候选编码基因在生长发育及致病过程中的转录水平分析 | 第70-71页 |
| 2.5 大豆疫霉HSF候选编码基因在氧化压力下的转录水平分析 | 第71-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 第二章 PSHSF1参与调控大豆疫霉氧化压力应答和抑制植物防卫反应 | 第80-112页 |
| 1 材料与方法 | 第83-89页 |
| 1.1 供试菌株及卵菌表达载体 | 第83页 |
| 1.2 大豆疫霉菌株的培养及无性发育和侵染各阶段菌体的获得 | 第83-84页 |
| 1.3 氧胁迫处理条件下大豆疫霉菌丝的获得 | 第84页 |
| 1.4 RNA提取和SYBR-green Real-time RT-PCR分析 | 第84页 |
| 1.5 载体的构建 | 第84-85页 |
| 1.6 大豆疫霉遗传转化 | 第85-87页 |
| 1.7 大豆疫霉转化子筛选 | 第87页 |
| 1.8 致病性测定 | 第87页 |
| 1.9 侵染菌丝的定量 | 第87-88页 |
| 1.10 胼胝质和活性氧的细胞学观察 | 第88页 |
| 1.11 胞外氧化酶和漆酶的活性测定 | 第88页 |
| 1.12 酵母转化 | 第88-89页 |
| 1.13 酵母的氧化压力敏感性测定 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-102页 |
| 2.1 大豆疫霉PsHSF1基因的克隆及同源性比较 | 第89-91页 |
| 2.2 PsHSF1在氧化压力诱导下迅速上调表达 | 第91页 |
| 2.3 PsHSF1可以互补酵母突变体菌株⊿SKN7对氧化压力的敏感性 | 第91-93页 |
| 2.4 PsHSF1的沉默导致大豆疫霉致病力显著下降 | 第93-94页 |
| 2.5 PsHSF1沉默转化子抑制寄主免疫反应的能力减弱 | 第94-97页 |
| 2.6 PsHSF1的沉默影响大豆疫霉胞外酶的活性 | 第97-98页 |
| 2.7 PsHSF1沉默转化子中胞外氧化酶和漆酶编码基因的转录水平下降 | 第98-100页 |
| 2.8 漆酶编码基因PsLAC4的瞬时沉默影响大豆疫霉的致病性和漆酶活性 | 第100-102页 |
| 2.9 LAC4和LAC5的启动子区有HSE类似元件分布 | 第102页 |
| 3 讨论 | 第102-106页 |
| 3.1 大豆疫霉PsHSF1可互补酵母SKN7突变体表型 | 第103页 |
| 3.2 大豆疫霉PsHSF1清除植物防卫反应积累ROS的机制 | 第103-104页 |
| 3.3 PsHSF1下游基因的预测 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-112页 |
| 第三章 转录因子PSBZPC32在大豆疫霉生长发育及致病过程中的功能研究 | 第112-144页 |
| 1 材料与方法 | 第115-119页 |
| 1.1 供试菌株的保存和活化 | 第115页 |
| 1.2 PsBZPc32同源序列的保守结构域预测和系统发育分析 | 第115页 |
| 1.3 大豆疫霉氧胁迫处理条件下、无性发育和侵染各阶段样品制备 | 第115-116页 |
| 1.4 RNA提取和SYBR green Real-time RT-PCR分析 | 第116页 |
| 1.5 载体的构建 | 第116页 |
| 1.6 大豆疫霉遗传转化和沉默转化子筛选 | 第116-117页 |
| 1.7 PsBZPc32沉默转化子的表型分析 | 第117-118页 |
| 1.8 致病性测定 | 第118页 |
| 1.9 DAB染色检测ROS | 第118页 |
| 1.10 PsBZPc32细胞定位的显微观察 | 第118页 |
| 1.11 DAPI染色及荧光显微观察 | 第118-119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-135页 |
| 2.1 大豆疫霉PsBZPc32基因的克隆及结构分析 | 第119-121页 |
| 2.2 PsBZPc32在氧化压力胁迫、无性生活史和侵染各阶段的转录水平分析 | 第121页 |
| 2.3 PsBZPc32可以定位在细胞核中 | 第121-123页 |
| 2.4 PsBZPc32基因沉默转化子的获得 | 第123-125页 |
| 2.5 PsBZPc32沉默转化子的休止孢萌发率下降且萌发形态异常 | 第125页 |
| 2.6 PsBZPc32的沉默不影响大豆疫霉对细胞壁胁迫因子敏感性 | 第125-127页 |
| 2.7 PsBZPc32沉默转化子对氧化压力更敏感 | 第127-128页 |
| 2.8 PsBZPc32的沉默对胞外氧化酶和漆酶的活性没有明显影响 | 第128-130页 |
| 2.9 PsBZPc32的沉默导致大豆疫霉致病力下降 | 第130-131页 |
| 2.10 PsBZPc32沉默转化子不能抑制寄主活性氧的积累 | 第131-133页 |
| 2.11 PsBZPc32的过表达对大豆疫霉致病力没有影响 | 第133-135页 |
| 3 讨论 | 第135-138页 |
| 3.1 PsBZPc32的功能域分析 | 第135-136页 |
| 3.2 PsBZPc32参与氧化压力的应答过程 | 第136-137页 |
| 3.3 PsBZPc32沉默对休止孢萌发和致病性的影响 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-144页 |
| 第四章 PSBZPC32调控氧化压力应答和致病过程的分子机制研究 | 第144-174页 |
| 1 材料与方法 | 第148-153页 |
| 1.1 细胞定位载体构建 | 第148-149页 |
| 1.2 大豆疫霉稳定转化 | 第149-150页 |
| 1.3 荧光转化子的定位观察和DAPI染色 | 第150页 |
| 1.4 磷酸化位点预测和分析 | 第150页 |
| 1.5 蛋白提取 | 第150-151页 |
| 1.6 SDS-PAGE胶制备及Western-blot | 第151-152页 |
| 1.7 Phos-tag SDS-PAGE胶制备及Western-blot | 第152-153页 |
| 1.8 PsBZPc32原核表达多克隆抗体制备 | 第153页 |
| 1.9 CO-IP | 第153页 |
| 1.10 RNA提取和SYBR green Real-time RT-PCR分析 | 第153页 |
| 2 结果与分析 | 第153-165页 |
| 2.1 PsBZPc32的磷酸化位点预测与磷酸化组数据分析 | 第153-156页 |
| 2.2 PsBZPc32在氧化压力下的磷酸化状态发生变化 | 第156-157页 |
| 2.3 PsBZPc32的细胞定位在氧化压力下从细胞质向细胞核中转移 | 第157-159页 |
| 2.4 磷酸化位点S212和S236失活后PsBZPc32不能定位于细胞核 | 第159-160页 |
| 2.5 PAS功能域的缺失不影响PsBZPc32的亚细胞定位 | 第160-161页 |
| 2.6 PsBZPc32互作蛋白的分析 | 第161页 |
| 2.7 PsBZPc32的沉默影响侵染阶段Avh基因的转录 | 第161-163页 |
| 2.8 通过转录组分析寻找PsBZPc32调控的候选基因 | 第163-165页 |
| 3 讨论 | 第165-169页 |
| 3.1 PsBZPc32应答氧化压力的机制 | 第166页 |
| 3.2 PsBZPc32对下游基因的转录调控 | 第166-169页 |
| 参考文献 | 第169-174页 |
| 附表1 | 第174-176页 |
| 附表2 | 第176-181页 |
| 附表3 | 第181-184页 |
| 全文总结及创新点 | 第184-186页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第186-188页 |
| 致谢 | 第188页 |
