| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-14页 |
| ·水稻细胞质雄性不育 | 第10-11页 |
| ·水稻细胞质雄性不育的分类 | 第10页 |
| ·水稻细胞质雄性不育的基因 | 第10-11页 |
| ·水稻细胞质雄性不育性恢复基因 | 第11-13页 |
| ·已克隆的水稻CMS育性恢复基因 | 第12页 |
| ·水稻CMS育性恢复基因的作用机制 | 第12-13页 |
| ·实验研究的内容及意义 | 第13-14页 |
| 第二章 水稻育性恢复基因Rf6分子标记的开发 | 第14-23页 |
| ·材料与方法 | 第14-15页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·实验设备 | 第14页 |
| ·实验试剂 | 第14-15页 |
| ·化学试剂 | 第14-15页 |
| ·质粒DNA提取及克隆过程中所需试剂的配制 | 第15页 |
| ·PCR引物 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第15-16页 |
| ·Rf6基因的PCR扩增与纯化 | 第16-17页 |
| ·Rf6基因的PCR扩增 | 第16-17页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第17页 |
| ·Rf6基因的克隆 | 第17-18页 |
| ·PCR产物与pMD 18T载体的连接 | 第17页 |
| ·连接产物热击转化大肠杆菌DH5α | 第17-18页 |
| ·重组质粒的鉴定与阳性菌株的保存 | 第18页 |
| ·遗传标记Rf6 JD | 第18-19页 |
| ·结果分析 | 第19-22页 |
| ·PCR产物纯化后检测 | 第19-20页 |
| ·TA- Rf6克隆载体的构建 | 第20-21页 |
| ·开发特异遗传标记Rf6 JD | 第21-22页 |
| ·结果讨论 | 第22-23页 |
| 第三章 水稻育性恢复基因Rf6表达载体构建及遗传转化 | 第23-36页 |
| ·材料与方法 | 第23-25页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验设备 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·化学试剂 | 第24页 |
| ·质粒DNA提取及克隆过程中所需试剂的配制： | 第24页 |
| ·植物组织培养所需培养基以及激素溶液： | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·农杆菌EH105感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·pCAMBIA1302∷35S∷Rf6植物表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·Rf6基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第26页 |
| ·双酶切 | 第26-27页 |
| ·PCR产物与pCAMBIA1302载体的连接 | 第27页 |
| ·连接产物热击转化大肠杆菌DH5α | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定与阳性菌株的保存 | 第27页 |
| ·pCAMBIA1302∷35S∷Rf6植物表达载体的遗传转化 | 第27-28页 |
| ·水稻种子的预处理 | 第27-28页 |
| ·培养基的配置以及愈伤诱导、继代 | 第28页 |
| ·农杆菌的活化以及愈伤组织的侵染 | 第28页 |
| ·抗性愈伤的筛选分化 | 第28页 |
| ·转基因苗生根，炼苗以及移栽 | 第28页 |
| ·转基因苗植株鉴定 | 第28-29页 |
| ·水稻花粉育性检测 | 第29-30页 |
| ·结果分析 | 第30-35页 |
| ·pCAMBIA1302::35S::Rf6载体构建 | 第30页 |
| ·pCAMBIA1302∷35S∷Rf6表达载体的遗传转化 | 第30-31页 |
| ·转基因植株阳性鉴定 | 第31-34页 |
| ·转基因植株花粉育性鉴定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 育性恢复基因Rf6的原核表达及蛋白纯化 | 第36-46页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·研究对象 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·原核表达中间载体的构建 | 第38-39页 |
| ·目的片段的获得 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组融合蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的Western Blot检测 | 第40页 |
| ·纯化蛋白检测 | 第40页 |
| ·结果分析 | 第40-45页 |
| ·原核表达中间载体的构建 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41页 |
| ·原核表达载体诱导表达条件的优化 | 第41-44页 |
| ·Western Blot检测目的蛋白 | 第44-45页 |
| ·蛋白纯化检测 | 第45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
