TALEN介导的转人血清白蛋白（HSA）基因山羊克隆胚的制备
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一章 人血清白蛋白的研究进展 | 第12-17页 |
| ·概述 | 第12-13页 |
| ·HSA基因 | 第13页 |
| ·HAS蛋白 | 第13-15页 |
| ·HSA的代谢 | 第15页 |
| ·HSA的生物功能 | 第15页 |
| ·HSA在生物医药上的应用 | 第15-16页 |
| ·展望 | 第16-17页 |
| 第二章 TALEN介导的基因编辑 | 第17-26页 |
| ·概述 | 第17-18页 |
| ·基因编辑技术的发展 | 第18页 |
| ·TALEN技术 | 第18-20页 |
| ·TALE DNA识别编码 | 第19页 |
| ·TALE的结构 | 第19-20页 |
| ·TALENs | 第20页 |
| ·TALEN体系结构和组装方法 | 第20页 |
| ·TALEN的应用 | 第20-21页 |
| ·在动物中的应用 | 第21页 |
| ·研究基因功能 | 第21页 |
| ·应用于大规模的基因组编辑 | 第21页 |
| ·影响TALEN效率的因素 | 第21-24页 |
| ·用于同源重组的供体DNA | 第22页 |
| ·TALEN的传递 | 第22-23页 |
| ·TALEN的传递方法 | 第23页 |
| ·打靶位点的选择 | 第23页 |
| ·突变的检测 | 第23-24页 |
| ·核酸外切酶对NHEJ的加强 | 第24页 |
| ·TALEN转录因子的设计 | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| 实验部分 | 第26-54页 |
| 第三章 HSA乳腺打靶载体的构建及功能验证 | 第26-45页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·组织 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·HSA打靶载体的构建 | 第27-30页 |
| ·HSA基因的获得 | 第27-29页 |
| ·p BA-HSA载体的构建 | 第29-30页 |
| ·HSA打靶载体pg B-HSA-puro的构建 | 第30页 |
| ·pg B-HSA-puro打靶载体的功能验证 | 第30-35页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的原代培养 | 第30页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的鉴定 | 第30-31页 |
| ·puro最佳筛选浓度的确定 | 第31页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染 | 第31-32页 |
| ·乳腺上皮细胞的筛选 | 第32页 |
| ·乳腺上皮细胞单克隆的鉴定 | 第32-33页 |
| ·打靶细胞的诱导 | 第33页 |
| ·HAS m RNA水平表达的检测 | 第33-34页 |
| ·HSA蛋白水平的检测 | 第34页 |
| ·数据统计与分析 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-42页 |
| ·HSA打靶载体的构建 | 第35-37页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的原代培养 | 第37页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的鉴定 | 第37-38页 |
| ·puro筛选浓度的确定 | 第38页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染和筛选 | 第38-39页 |
| ·乳腺上皮细胞单克隆的鉴定 | 第39-41页 |
| ·HSA m RNA水平表达的检测 | 第41页 |
| ·HSA蛋白水平的检测 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第四章 TALEN介导的转HSA山羊重构胚的获得 | 第45-54页 |
| ·材料和试剂 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·主要试剂及配制 | 第45-46页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第46页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的转染 | 第46-47页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第47页 |
| ·山羊卵母细胞的收集和体外成熟 | 第47页 |
| ·体细胞的核移植和胚胎培养 | 第47-48页 |
| ·供体细胞的准备 | 第47页 |
| ·卵母细胞的去核和注核 | 第47页 |
| ·胚胎的激活和培养 | 第47-48页 |
| ·数据统计与分析 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第48页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第48-50页 |
| ·体细胞的核移植和胚胎培养 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
