| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-14页 |
| 第一部分 Ⅰ-Ⅳ型登革病毒非结构蛋白NS1通用单克隆抗体的制备 | 第14-26页 |
| 1 实验材料 | 第14-16页 |
| ·免疫抗原和检测抗原 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·主要实验材料 | 第15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15-16页 |
| ·主要溶液配方 | 第16页 |
| 2 实验操作与方法 | 第16-22页 |
| ·免疫抗原的选择和制备 | 第16-17页 |
| ·免疫动物 | 第17页 |
| ·小鼠免疫后经ELISA方法检测其血清效价 | 第17-18页 |
| ·制备饲养细胞 | 第18页 |
| ·杂交瘤细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·单克隆细胞株的筛选 | 第19页 |
| ·腹水的制备 | 第19页 |
| ·腹水抗体的纯化 | 第19-20页 |
| ·抗体蛋白浓度的检测 | 第20-21页 |
| ·间接免疫荧光检测抗体特异性 | 第21页 |
| ·Western blots检测抗体特异性 | 第21-22页 |
| ·单克隆抗体稳定性的检测 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-24页 |
| ·免疫小鼠以及血清效价检测 | 第22页 |
| ·杂交瘤细胞的制备和筛选 | 第22-23页 |
| ·抗体的纯化 | 第23页 |
| ·免疫荧光法检测抗体 | 第23页 |
| ·Western blots检测抗体 | 第23-24页 |
| ·杂交瘤细胞株稳定性研究 | 第24页 |
| 4 讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1基因克隆、表达、纯化及鉴定 | 第26-44页 |
| 1 实验材料 | 第26-28页 |
| ·病毒与细胞 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·载体质粒 | 第26页 |
| ·酶、抗体以及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·主要的生物化学试剂 | 第27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| ·主要溶液配方 | 第27-28页 |
| 2 实验操作与方法 | 第28-38页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒的获取 | 第28页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒核酸的提取 | 第28页 |
| ·病毒cDNA的获取 | 第28-29页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ登革病毒非结构蛋白NS1全基因的获取 | 第29-30页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1-pMD19T载体的构建 | 第30-32页 |
| ·pET30a-NS1表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ登革病毒NS1重组蛋白的表达及纯化 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第36-37页 |
| ·Western blots鉴定重组蛋白 | 第37页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ登革病毒重组蛋白NS1免疫原性的检测 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-42页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1全基因的获取 | 第38页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1-pMD19T载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒pET30a-NS1表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第40页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1重组蛋白的纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1重组蛋白免疫原性的检测 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三部分 登革病毒NS1抗原ELISA检测方法的建立 | 第44-51页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| ·实验试剂和材料 | 第44页 |
| ·主要实验器材 | 第44页 |
| 2 实验操作与方法 | 第44-46页 |
| ·捕获抗体和检测抗体的选择 | 第44-45页 |
| ·确定最佳包板浓度、生物素检测抗体浓度以及亲和素抗体浓度 | 第45页 |
| ·双抗夹心检测方法的建立 | 第45页 |
| ·变异系数以及稳定性的初步检测 | 第45-46页 |
| ·最低抗原检出下限的测定 | 第46页 |
| ·特异性检测 | 第46页 |
| ·临床血清学检测 | 第46页 |
| 3 结果分析 | 第46-50页 |
| ·捕获抗体和检测抗体的选择 | 第46页 |
| ·确定最佳包板浓度和生物素检测抗体浓度以及亲和素抗体浓度 | 第46-48页 |
| ·双抗体夹心检测方法的建立 | 第48页 |
| ·变异系数以及稳定性的初步检测 | 第48-49页 |
| ·最低抗原检测下限 | 第49-50页 |
| ·ELISA检测方法的特异性 | 第50页 |
| ·临床血清学检测 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 个人简历 | 第59-60页 |
