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姜黄素通过调控miR-21/PTEN通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的实验研究

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-8页
第1章 前言第8-10页
第2章 实验材料第10-13页
   ·实验对象第10页
   ·主要实验仪器第10页
   ·实验试剂第10-12页
   ·主要试剂配制第12-13页
第3章 实验方法与步骤第13-27页
   ·实验相关器材的准备与处理第13页
     ·细胞培养级玻璃容器的清洗及消毒第13页
     ·提取RNA耗材第13页
   ·细胞培养第13-14页
     ·复苏及培养第13页
     ·细胞传代第13-14页
     ·细胞冻存第14页
   ·姜黄素母液的配制第14-15页
     ·姜黄素物理特性第14-15页
     ·具体步骤第15页
   ·MTS法检测姜黄素对A549细胞增殖影响第15-16页
     ·MTS法原理第15页
     ·操作步骤第15-16页
   ·q RT-PCR法测定不同浓度姜黄素处理后的A549细胞miR-21表达情况第16-20页
     ·不同浓度姜黄素处理A549细胞第16页
     ·提取总RNA第16-18页
     ·miRNA cDNA第一链的合成第18-19页
     ·SYBR Green I法进行miR-21的荧光定量检测第19-20页
   ·细胞转染第20-22页
     ·实验分组第20-21页
     ·使用lipofectamine 2000(Invitrogen)进行细胞转染第21-22页
     ·miR-21的转染方法同si RNA第22页
   ·Western Blot法检测转染前后PTEN蛋白水平的表达第22-25页
     ·蛋白样品制备第22-23页
     ·BCA法进行蛋白定量第23页
     ·SDS-PAGE电泳第23-24页
     ·转膜第24-25页
     ·免疫反应第25页
     ·ECL化学发光显影第25页
   ·统计学方法第25-27页
第4章 实验结果第27-33页
   ·姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖的影响第27-28页
   ·姜黄素对miR-21在A549细胞中表达的影响第28-30页
   ·沉默PTEN基因、过表达miR-21分别与姜黄素处理对A549细胞PTEN蛋白表达的影响第30-33页
     ·沉默PTEN基因与姜黄素处理对A549细胞PTEN蛋白表达的影响第30-31页
     ·过表达miR-21与姜黄素处理对A549细胞PTEN蛋白表达的影响第31-33页
第5章 讨论第33-36页
第6章 结论与展望第36-37页
   ·结论第36页
   ·展望第36-37页
致谢第37-38页
参考文献第38-42页
综述第42-50页
 参考文献第46-50页

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