| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1. 防御素研究历程 | 第13-14页 |
| 2. 几种抗菌肽概述 | 第14-17页 |
| ·人类α-防御素5 | 第14-15页 |
| ·人类β-防御素2和β-防御素3 | 第15-17页 |
| ·海鞘抗菌肽ClavE | 第17页 |
| 3. 防御素作用机理 | 第17-18页 |
| 4. 防御素的医学价值 | 第18-19页 |
| 5. 抗菌肽的基因工程研究现状 | 第19-21页 |
| ·防御素在大肠杆菌中的表达 | 第19-20页 |
| ·防御素基因在酵母中的表达 | 第20-21页 |
| 6. 本课题研究思路及拟研究的内容 | 第21-23页 |
| 第二章 抗菌肽基因克隆及真核重组表达载体的构建 | 第23-36页 |
| 1. 材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·菌株、质粒 | 第23页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-32页 |
| ·序列的获取与优化 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24-26页 |
| ·目的片段的获取 | 第26-27页 |
| ·目的片段连入真核表达载体 | 第27-28页 |
| ·实验操作 | 第28-32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| 3. 实验结果 | 第32-34页 |
| ·目的片段电泳检测结果 | 第32页 |
| ·重组质粒PCR筛选结果 | 第32-33页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第33-34页 |
| 4. 小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 重组抗菌肽的真核表达及活性分析 | 第36-51页 |
| 1. 材料与试剂 | 第36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-41页 |
| ·酿酒酵母电转化 | 第36-37页 |
| ·酿酒酵母培养条件 | 第37页 |
| ·发酵液上清的收集 | 第37页 |
| ·其它试剂配置方法 | 第37-40页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE凝胶配置 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE凝胶配置 | 第38-39页 |
| ·制备凝胶 | 第39-40页 |
| ·凝胶图象分析 | 第40页 |
| ·分离纯化实验步骤及相关试剂配置 | 第40页 |
| ·溶液配置 | 第40页 |
| ·纯化步骤 | 第40页 |
| ·抑菌实验 | 第40-41页 |
| 3. 实验结果 | 第41-49页 |
| ·单基因酵母表达结果 | 第41-43页 |
| ·pVT102U-α-ClavE表达结果 | 第41页 |
| ·pVT102U-α-HD5表达结果 | 第41-42页 |
| ·pVT102U-α-HBD2和pVT102U-α-HBD3表达结果 | 第42-43页 |
| ·pVT102U-α-ClavE-HD5融合基因酵母表达结果 | 第43页 |
| ·抗菌肽纯化结果 | 第43-48页 |
| ·HD5纯化结果 | 第43-45页 |
| ·HBD2纯化结果 | 第45-46页 |
| ·HBD3纯化结果 | 第46-48页 |
| ·抗菌肽抑菌实验结果 | 第48-49页 |
| ·金黄色葡萄球菌抑菌结果 | 第48页 |
| ·大肠杆菌抑菌结果 | 第48-49页 |
| 4. 小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 防御素的原核重组表达 | 第51-60页 |
| 1. 材料与试剂 | 第51页 |
| ·菌株、质粒 | 第51页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·主要溶液配制 | 第51页 |
| 2. 实验方法 | 第51-55页 |
| ·序列的获取 | 第51页 |
| ·引物的设计与合成 | 第51-52页 |
| ·目的片段的获取 | 第52-53页 |
| ·目的片段连入原核表达载体 | 第53页 |
| ·重组菌制备和诱导表达 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌细胞破碎及胞内蛋白提取 | 第54页 |
| ·实验操作 | 第54-55页 |
| 3. 实验结果 | 第55-58页 |
| ·目的片段电泳检测结果 | 第55页 |
| ·重组质粒PCR筛选结果 | 第55-56页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第56页 |
| ·pET30a-ClavE-HD5原核表达结果 | 第56-57页 |
| ·pET30a-ClavE-HBD3原核表达结果 | 第57页 |
| ·ClavE-HBD3和ClavE-HD5可溶性分析 | 第57-58页 |
| 4. 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 1. 结论 | 第60页 |
| 2. 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
