| 摘要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 MIF的简介 | 第10-11页 |
| 2 MIF的来源、结构及多态性 | 第11-13页 |
| ·MIF的来源 | 第11页 |
| ·MIF的结构及多态性 | 第11-13页 |
| 3 MIF的生物学功能 | 第13-15页 |
| ·MIF对糖皮质激素作用 | 第13页 |
| ·MIF是免疫和炎症性疾病的重要前炎症细胞因子 | 第13-14页 |
| ·在T淋巴细胞介导的免疫性疾病中的作用 | 第14页 |
| ·在巨噬细胞介导的先天免疫反应中的作用 | 第14页 |
| ·在基质金属蛋白酶(MMPs)介导的组织损伤中的作用 | 第14-15页 |
| ·调节物质能量代谢 | 第15页 |
| 4 MIF的分子作用机制 | 第15-17页 |
| 5 MIF与各种疾病 | 第17-19页 |
| ·MIF与心血管系统疾病 | 第17页 |
| ·MIF与皮肤病 | 第17-18页 |
| ·MIF与肿瘤 | 第18-19页 |
| 6 结语 | 第19-20页 |
| 本实验立项依据和研究意义 | 第20-21页 |
| 本实验的基本思路 | 第21-22页 |
| 一、鸡MIF蛋白原核表达 | 第22-36页 |
| 1 实验材料 | 第22-27页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·缓冲液与常用试剂的配制 | 第23-27页 |
| 2 试验方法 | 第27-31页 |
| ·质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28页 |
| ·测序鉴定 | 第28页 |
| ·重组MIF蛋白的表达 | 第28-31页 |
| ·重组MIF蛋白的小量表达 | 第28-29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达情况 | 第29-30页 |
| ·MIF蛋白表达形式分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-34页 |
| ·阳性质粒酶切与测序鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·重组MIF蛋白小量表达结果 | 第32-33页 |
| ·MIF蛋白表达形式 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 二、鸡MIF的纯化和初步鉴定 | 第36-44页 |
| 1 实验材料 | 第36-38页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·缓冲液的配制 | 第36-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-41页 |
| ·MIF蛋白大量表达及纯化 | 第38-39页 |
| ·定量测定纯化MIF蛋白 | 第39-40页 |
| ·表达产物Western blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-43页 |
| ·MIF蛋白大量表达纯化结果 | 第41页 |
| ·纯化MIF蛋白的蛋白定量分析 | 第41-42页 |
| ·表达产物Western blot鉴定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 三、鸡MIF多克隆抗体的制备 | 第44-50页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| ·试验动物与试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·缓冲液的配制 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-47页 |
| ·原核表达MIF蛋白 | 第45页 |
| ·家兔免疫 | 第45页 |
| ·样品的采集与检测 | 第45-47页 |
| ·血清的收集 | 第45-46页 |
| ·抗体效价的检测 | 第46页 |
| ·Westem Blot检测 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-48页 |
| ·ELISA实验 | 第47-48页 |
| ·Western blot鉴定 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 四、全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| ABSTRACT | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |