| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-18页 |
| ·MicroRNA是一类具有多种功能的小分子RNA | 第13-15页 |
| ·miRNA的产生途径与功能作用 | 第13-15页 |
| ·miRNA和癌症 | 第15页 |
| ·miRNA调控的信号通路 | 第15-17页 |
| ·miRNA与凋亡 | 第15-16页 |
| ·miRNA与细胞周期调控 | 第16-17页 |
| ·研究目的与方法 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·细菌及细胞培养相关溶液 | 第18-19页 |
| ·Western blot所需溶液 | 第19-20页 |
| ·引物合成 | 第20-22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·总RNA提取 | 第22页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第22-23页 |
| ·Real-Time PCR检测mRNA表达 | 第23页 |
| ·总RNAPoly(A)加尾 | 第23页 |
| ·实时定量PCR检测miRNA的表达 | 第23-24页 |
| ·细胞培养及转染 | 第24页 |
| ·细胞克隆形成实验 | 第24页 |
| ·裸鼠成瘤模型建立 | 第24-25页 |
| ·双荧光素酶表达载体及突变体的构建 | 第25-27页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统检测miR-193b作用的靶位点 | 第27-28页 |
| ·Western blot分析 | 第28-29页 |
| ·细胞增殖检测 | 第29页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡 | 第29页 |
| ·检测caspase-3/7活性 | 第29-30页 |
| ·Annexin-Ⅴ凋亡检测 | 第30-31页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第31-45页 |
| ·miR-193b在人肝癌组织样本中表达显著下调 | 第31-32页 |
| ·miR-193b甲基化分析 | 第32-33页 |
| ·Real-time PCR方法筛选miR-193b的候选靶基因 | 第33-34页 |
| ·miR-193b负性调控CCND1和MCL1的表达 | 第34-35页 |
| ·miR-193b可调控内源CCND1和MCL1的表达 | 第35-36页 |
| ·miR-193b可通过调控CCND1的表达诱导细胞周期阻滞 | 第36-37页 |
| ·miR-193b可诱导Caspase3/7水平的升高 | 第37-38页 |
| ·miR-193b可诱导细胞出现细胞凋亡形态学现象 | 第38-39页 |
| ·miR-193b可通过调控MCL1的表达诱导细胞凋亡 | 第39-40页 |
| ·miR-193b可抑制体外培养细胞的增殖及裸鼠细胞成瘤 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 个人简历 | 第52-53页 |
| 学术成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
