| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·聚酮及聚酮合酶 | 第10-14页 |
| ·聚酮化合物的多样性及其药用价值 | 第10页 |
| ·聚酮合酶 | 第10-14页 |
| ·真菌PKS | 第14-18页 |
| ·真菌PKS的克隆及鉴定 | 第14-15页 |
| ·真菌PKS的功能分析 | 第15-16页 |
| ·真菌PKS的异源表达 | 第16-18页 |
| ·PKS-NRPS数据库简介 | 第18-19页 |
| ·本课题的研究内容和意义 | 第19-22页 |
| ·灰绿霉素A合成相关的聚酮合酶基因的克隆及功能鉴定 | 第19-22页 |
| 第2章 灰绿霉素A合成相关的PKS基因的克隆鉴定及序列分析 | 第22-32页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株及质粒 | 第22页 |
| ·实验所用试剂及试剂盒 | 第22页 |
| ·主要培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·基因组提取 | 第23页 |
| ·灰绿曲霉PKS基因简并引物的设计 | 第23页 |
| ·染色体步移 | 第23-25页 |
| ·灰绿曲霉RNA抽提及残留DNA的去除 | 第25页 |
| ·实验结果与讨论 | 第25-31页 |
| ·灰绿霉素A合成相关的聚酮合酶基因的简并引物设计 | 第25页 |
| ·NR-PKS与PR-PKS基因片段 | 第25-26页 |
| ·Genome Walking扩增灰绿曲霉PKS序列 | 第26-30页 |
| ·Agpks1进化树的构建 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第3章 灰绿曲霉(HB1-19、)中△AgKS-AT菌株构建 | 第32-42页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·菌株培养条件 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·引物设计及PCR反应 | 第33-34页 |
| ·灰绿曲霉原生质体的制备及转化方法 | 第34-35页 |
| ·AgKS-AT、AgACP-TE和Agpks1敲除质粒的构建 | 第35-38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-41页 |
| ·△AgKS-AT,△AgACP-TE和△Agpks1敲除质粒 | 第38-40页 |
| ·△AgKS-AT转化子验证 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第4章 △AgKS-AT缺失株表观形态及无性生殖分析 | 第42-49页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·△AgKS-AT缺失株菌丝形态的观察 | 第42页 |
| ·缺失株菌落直径测定 | 第42页 |
| ·子囊果及分生孢子计数 | 第42-43页 |
| ·实验结果与讨论 | 第43-48页 |
| ·灰绿曲霉中缺失AgKS-AT基因对其发育的影响 | 第43-44页 |
| ·缺失株与野生株表型比较 | 第44页 |
| ·△AgKS-AT缺失株菌落直径 | 第44-45页 |
| ·立体显微镜及扫描电镜分析△AgKS-AT缺失株分生孢子头 | 第45-47页 |
| ·发酵液颜色的对比 | 第47-48页 |
| ·△AgKS-AT缺失株的pH值和菌体干重 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第5章 Agpks1基因的功能鉴定 | 第49-59页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·实验材料和方法 | 第49-52页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·灰绿霉素A测定 | 第49-50页 |
| ·Catenarin的测定 | 第50-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-58页 |
| ·灰绿曲霉野生株和△AgKS-AT代谢产物的鉴定 | 第52-56页 |
| ·不同时间段灰绿霉A和Catenarin含量对比 | 第56页 |
| ·灰绿霉素A生源合成途径的推导 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第6章 结论与展望 | 第59-62页 |
| ·主要结论 | 第59-60页 |
| ·创新点 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
