| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一部分 鱼藤酮通过诱导细胞内 Ca~(2+)水平变化及氧化应激引起 SHSY5Y 细胞的老化 | 第19-37页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第19-21页 |
| ·细胞株 | 第19页 |
| ·药物 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要试剂配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-25页 |
| ·细胞培养和传代 | 第21页 |
| ·细胞冻存和复苏 | 第21页 |
| ·细胞冻存 | 第21页 |
| ·细胞复苏 | 第21页 |
| ·细胞分组 | 第21-22页 |
| ·鱼藤酮药液的配制 | 第22页 |
| ·细胞计数方法 | 第22页 |
| ·药物敏感性试验（MTT 法） | 第22页 |
| ·倒置显微镜观察鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞形态的影响 | 第22-23页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡率（AnnexinV/PI 双染） | 第23页 |
| ·Western blotting（WB）法检测细胞中 cleavageCaspase3 蛋白表达水平 | 第23页 |
| ·细胞老化实验 | 第23-24页 |
| ·细胞化学法检测β半乳糖苷酶活性 | 第23页 |
| ·Elisa 试剂盒检测细胞内脂褐素的含量 | 第23-24页 |
| ·透射电镜观察细胞内脂褐素的形成 | 第24页 |
| ·鱼藤酮对细胞内 Ca~(2+)浓度的影响 | 第24-25页 |
| ·流式细胞术检测细胞内活性氧含量 | 第25页 |
| ·统计学方法 | 第25页 |
| 3. 结果 | 第25-35页 |
| ·鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞活力的影响（MTT 法） | 第25-26页 |
| ·倒置显微镜观察鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞形态的影响 | 第26页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡率（AnnexinV/PI 双染） | 第26-27页 |
| ·Western blotting 法检测细胞中 cleavageCaspase3 蛋白表达水平 | 第27-28页 |
| ·鱼藤酮诱导 SHSY5Y 细胞衰老 | 第28-31页 |
| ·细胞化学法检测 SAβ半乳糖苷酶活性 | 第28-29页 |
| ·Elisa 试剂盒检测细胞内脂褐素的含量 | 第29页 |
| ·透射电镜观察细胞内脂褐素的形成 | 第29-31页 |
| ·鱼藤酮对细胞内 Ca~(2+)浓度的影响 | 第31-33页 |
| ·流式细胞仪检测细胞内活性氧含量 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| ·鱼藤酮诱导细胞内 Ca~(2+)浓度的增加 | 第35-36页 |
| ·鱼藤酮诱导线粒体氧化应激 | 第36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第二部分 伊拉地平和 EGTA 干预鱼藤酮诱导 SHSY5Y 细胞老化的研究 | 第37-48页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第37-39页 |
| ·细胞株 | 第37页 |
| ·药物 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要试剂配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-41页 |
| ·细胞培养、传代、复苏和冻存 | 第39页 |
| ·实验分组及药物处理 | 第39页 |
| ·伊拉地平对鱼藤酮损伤 SHSY5Y 细胞的敏感性试验（MTT 法） | 第39页 |
| ·倒置显微镜观察伊拉地平对鱼藤酮损伤 SHSY5Y 细胞形态的影响 | 第39-40页 |
| ·细胞老化实验 | 第40页 |
| ·细胞化学法检测β半乳糖苷酶活性 | 第40页 |
| ·Elisa 试剂盒检测细胞内脂褐素的含量 | 第40页 |
| ·细胞内 Ca~(2+)浓度的检测 | 第40-41页 |
| ·流式细胞术实验 | 第41页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期（PI 单染） | 第41页 |
| ·流式细胞术检测细胞内活性氧含量 | 第41页 |
| ·统计处理方法 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·伊拉地平对鱼藤酮损伤 SHSY5Y 细胞的影响（MTT 法） | 第41-42页 |
| ·倒置显微镜观察伊拉地平和 EGTA 对鱼藤酮损伤 SHSY5Y 细胞形态的影响 | 第42-43页 |
| ·伊拉地平对鱼藤酮引起的 SHSY5Y 细胞老化的影响 | 第43-44页 |
| ·细胞化学法检测β半乳糖苷酶活 | 第43页 |
| ·Elisa 试剂盒检测细胞内脂褐素的含量 | 第43-44页 |
| ·细胞内 Ca~(2+)浓度的检测 | 第44-45页 |
| ·流式细胞术实验 | 第45-46页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期（PI 单染） | 第45页 |
| ·流式细胞术检测细胞内活性氧含量 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-47页 |
| ·细胞衰老和氧化应激 | 第46-47页 |
| ·细胞衰老和细胞周期停滞 | 第47页 |
| 5. 小结 | 第47-48页 |
| 第三部分 伊拉地平对鱼藤酮所致 SHSY5Y 细胞老化的分子机制研究 | 第48-61页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第48-51页 |
| ·细胞株 | 第48页 |
| ·药物 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·主要试剂配制 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-54页 |
| ·实验分组 | 第51页 |
| ·细胞处理 | 第51页 |
| ·蛋白样品制备 | 第51-52页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第52页 |
| ·SDS－PAGE 凝胶电泳 | 第52-54页 |
| ·统计处理方法 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-57页 |
| ·鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 p53、p21、p16 蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| ·鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 CDK2 和 cyclinD1 蛋白表达的影响 | 第55页 |
| ·鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 AKT 及 pAKT 蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
| ·伊拉地平干预后鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 p53、p21 和 p16 蛋白表达的影响 | 第56页 |
| ·伊拉地平干预后鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 CDK2 和 cyclinD1 蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| ·伊拉地平干预后鱼藤酮对 SHSY5Y 细胞 AKT 及 pAKT 蛋白表达的影响 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| ·细胞衰老和帕金森病 | 第57-58页 |
| ·p53/p21、p16 与细胞衰老 | 第58-59页 |
| ·细胞衰老和 AKT 的磷酸化 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 总结 | 第61-63页 |
| 实验线路图 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 综述 | 第70-81页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
| 硕士期间发表的科研论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
