| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-37页 |
| 1 NAD(H)激酶研究概况 | 第14-26页 |
| ·NAD、NADH、NADP与NADPH是生命活动的重要参与者 | 第14-15页 |
| ·NAD(H)激酶是调节NAD(H)与NADP(H)之间动态平衡的一个关键酶 | 第15-25页 |
| ·NAD(H)激酶的结构特征 | 第17-19页 |
| ·NAD(H)激酶的生物学功能 | 第19-22页 |
| ·NAD(H)激酶在酿酒酵母中的生物学功能 | 第19-20页 |
| ·NAD(H)激酶在植物中的生物学功能 | 第20-21页 |
| ·NAD(H)激酶在人类细胞中的生物学功能 | 第21-22页 |
| ·NAD(H)激酶在NADPH供给网络中的核心功能 | 第22-24页 |
| ·NAD(H)激酶在氧胁迫防御系统中的作用机制 | 第24-25页 |
| ·NAD(H)激酶活性调控机制的研究有待进一步深入 | 第25-26页 |
| 2 稻瘟病菌定殖及扩展机制的研究概况 | 第26-31页 |
| ·稻瘟病菌的病害循环 | 第27-28页 |
| ·稻瘟病菌的次级代谢与其在寄主内的定殖 | 第28-29页 |
| ·稻瘟病菌的蛋白效应子与其在寄主内的定殖 | 第29-30页 |
| ·稻瘟病菌在寄主内的扩展 | 第30-31页 |
| 3 活性氧物质与稻瘟病菌之间的密切关系 | 第31-35页 |
| ·胞内维持适量水平的活性氧物质是稻瘟病菌生长发育和致病所必需的 | 第32-33页 |
| ·由寄主植物免疫系统产生的活性氧物质是稻瘟病菌定殖扩展的障碍 | 第33-35页 |
| 4 本研究的意义 | 第35-37页 |
| 第二章 稻瘟病菌中NAD(H)激酶MoPos5的功能分析 | 第37-80页 |
| 1 材料与方法 | 第37-55页 |
| ·实验材料 | 第37-40页 |
| ·供试菌株 | 第37页 |
| ·供试质粒 | 第37-38页 |
| ·供试植物 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·生化试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-55页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶氨基酸序列的获得及生物信息学浅析 | 第40-41页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶氨基酸序列的获得 | 第40页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶的氨基酸序列及结构域分析 | 第40-41页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶蛋白理化性质分析 | 第41页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶系统进化分析 | 第41页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体、孢子、附着胞及其侵染稻叶的RNA提取 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR | 第42-43页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌的遗传转化 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌DH_(5α)普通感受态细胞的制备及转化 | 第44页 |
| ·大肠杆菌DH_(5α)超级感受态细胞的制备及转化 | 第44-45页 |
| ·酵母菌的遗传转化 | 第45页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·酵母感受态细胞的转化 | 第45页 |
| ·稻瘟病菌的遗传转化 | 第45-46页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第45-46页 |
| ·稻瘟病菌原生质体转化 | 第46页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体基因组DNA的粗提 | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的精提及其检测 | 第47页 |
| ·Southern杂交 | 第47-50页 |
| ·基因组DNA的酶解、转印及固定 | 第47-48页 |
| ·探针的标记和效价检测 | 第48-49页 |
| ·杂交及免疫显色 | 第49-50页 |
| ·尼龙膜的脱色与再杂交 | 第50页 |
| ·稻瘟病菌基因异源功能互补酵母相关突变体 | 第50-51页 |
| ·稻瘟病菌相关突变体的构建 | 第51-52页 |
| ·稻瘟病菌基因敲除突变体的构建 | 第51页 |
| ·稻瘟病菌功能互补突变体的构建 | 第51-52页 |
| ·稻瘟病菌过量表达突变体的构建 | 第52页 |
| ·稻瘟病菌目的基因与GFP融合表达突变体的构建 | 第52页 |
| ·稻瘟病菌生长发育及致病性的表型分析 | 第52-55页 |
| ·稻瘟病菌菌落直径测定 | 第52-53页 |
| ·稻瘟病菌产孢量统计 | 第53页 |
| ·分生孢子萌发率及附着胞形成率统计 | 第53页 |
| ·洋葱表皮侵染实验 | 第53页 |
| ·大麦离体接种实验 | 第53页 |
| ·水稻致病性鉴定 | 第53-54页 |
| ·稻瘟病菌分生孢子及分生孢子梗的形态观察 | 第54页 |
| ·稻瘟病菌离体接种水稻叶鞘后活性氧物质的检测 | 第54-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-76页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶的氨基酸序列及结构域分析 | 第55-56页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶的蛋白理化性质分析 | 第56-57页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶的系统进化分析 | 第57-60页 |
| ·稻瘟病菌NAD(H)激酶MoPos5的功能分析 | 第60-76页 |
| ·MoPos5在稻瘟病菌各生长发育阶段及致病过程中均有转录 | 第60页 |
| ·MoPos5初步定为在稻瘟病菌的线粒体中 | 第60-61页 |
| ·MoPos5异源互补酵母POS5突变体的氧胁迫生长缺陷 | 第61-63页 |
| ·MoPos5敲除及功能互补突变体的筛选与鉴定 | 第63-65页 |
| ·MoPos5的缺失导致稻瘟病菌菌丝体生长缺陷 | 第65-66页 |
| ·MoPos5的缺失导致稻瘟病菌产孢缺陷 | 第66-69页 |
| ·MoPos5的缺失导致稻瘟病菌致病性严重减弱 | 第69-72页 |
| ·MoPos5的缺失导致稻瘟病菌无法利用亚麻酸作为碳源 | 第72-73页 |
| ·MoPos5缺失突变体中一些相关基因的转录情况 | 第73-74页 |
| ·MoPos5过量表达对稻瘟病菌的生长发育及致病性并无明显影响 | 第74-76页 |
| 3 小结与讨论 | 第76-80页 |
| ·稻瘟病菌中的MoPos5是酿酒酵母POS5的直系同源基因 | 第76-77页 |
| ·MoPos5缺失导致稻瘟病菌菌丝体生长、产孢及致病性严重缺陷 | 第77-78页 |
| ·MoNADK2和MoNADK3在MoPos5缺失时上调表达 | 第78-79页 |
| ·MoPos5过量表达不影响稻瘟病菌的生长发育及致病性 | 第79-80页 |
| 第三章 MoPos5互作蛋白的筛选与鉴定 | 第80-99页 |
| 1 材料与方法 | 第80-85页 |
| ·实验材料 | 第80-82页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第80-81页 |
| ·酵母生长培养丛 | 第81-82页 |
| ·生化试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-85页 |
| ·MoPos5基因诱饵载体的构建 | 第82页 |
| ·诱饵载体质粒转化酵母菌株Y187及转化子验证 | 第82页 |
| ·重组质粒对酵母菌株Y187的细胞毒性检测 | 第82页 |
| ·重组质粒的自激活检测 | 第82-83页 |
| ·酵母菌株交配法筛库 | 第83-84页 |
| ·互作阳性克隆子的验证及其插入cDNA片段的测定 | 第84-85页 |
| ·互作克隆子的重复验证 | 第84页 |
| ·互作克隆子中cDNA插入片段的验证 | 第84页 |
| ·互作克隆子的一对一回复杂交验证 | 第84-85页 |
| ·酵母双杂交验证候选蛋白与MoPos5的互作关系 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-96页 |
| ·MoPos5 基因诱饵载体的构建及其酵母转化子的验证 | 第85-86页 |
| ·MoPos5的细胞毒性检测及自激活检测 | 第86-87页 |
| ·MoPos5互作蛋白的筛选与重复验证 | 第87-90页 |
| ·MoPos5互作阳性克隆子中cDNA插入序列的测定 | 第90-91页 |
| ·其余一些MoPos5候选互作蛋白的鉴定 | 第91-96页 |
| 3 小结与讨论 | 第96-99页 |
| 第四章 总结与展望 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-117页 |
| 附录 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
