| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-25页 |
| ·病原学 | 第19-21页 |
| ·病原特征 | 第19-20页 |
| ·生物学特性 | 第20页 |
| ·分子生物学研究 | 第20-21页 |
| ·流行病学 | 第21-22页 |
| ·小反刍兽疫诊断方法研究 | 第22-23页 |
| ·病毒分离 | 第22页 |
| ·病毒 RNA 检测 | 第22-23页 |
| ·血清学检测 | 第23页 |
| ·展望 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒 NIGERIA75/1 株 M 蛋白的原核表达及鉴定 | 第25-42页 |
| 摘要 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株、载体、病毒及细胞 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验所用主要试剂及配制方法 | 第25-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·PPRV M 基因稀有密码子分析 | 第29页 |
| ·病毒扩增 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·提取病毒总 RNA | 第30页 |
| ·RT-PCR 扩增 PPRV M 基因及纯化 | 第30-31页 |
| ·PPRV M 基因与 pCR 2.1T 载体连接、转化及阳性克隆鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒构建和鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白纯化及定量 | 第34页 |
| ·重组蛋白 Western blot 鉴定 | 第34页 |
| ·实验结果与分析 | 第34-41页 |
| ·PPRV M 基因稀有密码子分析结果 | 第34-35页 |
| ·PPRV Nigeria75/1 疫苗弱毒株扩增结果 | 第35页 |
| ·PCR 鉴定 PPRV M 基因 | 第35-36页 |
| ·重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·双酶切鉴定重组表达质粒 | 第37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·pET-32a-PPRV M 重组蛋白可溶性分析 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白纯化及定量 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白 Western blot 鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒 NIGERIA75/1 株 M 蛋白单克隆抗体制备及鉴定 | 第42-56页 |
| 摘要 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·蛋白、实验动物与细胞 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第42-43页 |
| ·主.要.溶.液.配.制 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·PPRV 浓缩抗原制备 | 第44页 |
| ·BLAB/C 小鼠免疫程序 | 第44-45页 |
| ·三免后小鼠血清效价测定 | 第45页 |
| ·建立杂交瘤细胞株 | 第45-47页 |
| ·冻存和复苏杂交瘤细胞 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体鉴定 | 第48-49页 |
| ·大量制备单克隆抗体 | 第49-50页 |
| ·实验结果分析 | 第50-54页 |
| ·三免后小鼠血清抗体效价测定 | 第50页 |
| ·单克隆细胞株的建立 | 第50页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定结果 | 第50页 |
| ·单克隆抗体抗原表位分析 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体 WESTERN BLOT 鉴定 | 第51-52页 |
| ·单克隆抗体间接免疫荧光实验 | 第52页 |
| ·单克隆抗体染色体分析 | 第52-53页 |
| ·小鼠腹水中单抗效价测定 | 第53页 |
| ·纯化的单克隆抗体 SDS-PAGE 分析 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体细胞稳定性评价 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 小反刍兽疫病毒 M 蛋白单抗竞争 ELISA 的建立 | 第56-63页 |
| 摘要 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·蛋白、单抗上清及血清 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第56页 |
| ·主要溶液配制 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·pET-32a-PPRV M 蛋白最佳包被浓度及单抗上清最佳稀释度确定 | 第56-57页 |
| ·最佳封闭剂选择 | 第57页 |
| ·山羊抗小鼠 IgG-HRP 最佳工作浓度确定 | 第57页 |
| ·山羊抗小鼠 IgG-HRP 最佳孵育时间确定 | 第57页 |
| ·最佳显色时间确定 | 第57页 |
| ·单抗竞争 ELISA 阴阳临界值判定 | 第57页 |
| ·单抗竞争 ELISA 操作程序 | 第57页 |
| ·待检血清样本稀释度确定 | 第57页 |
| ·单抗竞争 ELISA 交叉反应性评价 | 第57-58页 |
| ·单抗竞争 ELISA 稳定性评价 | 第58页 |
| ·临床血清样本检测 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-61页 |
| ·pET-32a-PPRV M 重组蛋白包被浓度和单抗上清最佳稀释度确定 | 第58-59页 |
| ·最佳封闭剂确定 | 第59页 |
| ·山羊抗小鼠 IgG-HRP 最佳工作浓度确定 | 第59页 |
| ·山羊抗小鼠 IgG-HRP 最佳孵育时间确定 | 第59-60页 |
| ·最佳显色时间确定 | 第60页 |
| ·待检血清样本稀释度确定 | 第60页 |
| ·单抗竞争 ELISA 交叉反应性评价 | 第60页 |
| ·单抗竞争 ELISA 稳定性评价 | 第60-61页 |
| ·临床血清样本检测 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 小反刍兽疫病毒 NIGERIA75/1 株 M 基因截短表达及鉴定 | 第63-75页 |
| 摘要 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要溶液配制 | 第63-64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·PRV M 基因抗原位点分析及表达蛋白可溶性预测 | 第64页 |
| ·引物设计与合成 | 第64页 |
| ·截短的 PPRV M 三段基因扩增及纯化 | 第64-65页 |
| ·TA 克隆载体重组质粒的构建及鉴定 | 第65页 |
| ·截短的 PPRV M 三段基因重组表达质粒的构建及鉴定 | 第65页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及 SDS-PAGE 分析 | 第65页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第65-66页 |
| ·pET-32a-PPRV M1 重组蛋白纯化及定量 | 第66页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第66页 |
| ·实验结果 | 第66-74页 |
| ·PPRV M 基因抗原位点分析及表达蛋白可溶性预测 | 第66页 |
| ·截短的 PPRV M 三段基因 PCR 鉴定 | 第66-67页 |
| ·截短的 PPRV M 三段基因重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第68页 |
| ·重组蛋白诱导表达及 SDS-PAGE 分析 | 第68-70页 |
| ·截短后的 PPRV M 重组蛋白可溶性分析 | 第70-71页 |
| ·pET-32a-PPRV M1 重组蛋白纯化及定量 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 第六章 基于 PPRV M1 重组蛋白间接 ELISA 方法的建立 | 第75-82页 |
| 摘要 | 第75页 |
| ·实验材料 | 第75页 |
| ·抗原及血清 | 第75页 |
| ·主要试剂及所用耗材 | 第75页 |
| ·主要仪器及主要溶液配制 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·pET-32a-PPRV M1 纯化蛋白间接 ELISA 方法的优化 | 第75-76页 |
| ·cut off 值及阴阳性判断标准确定方法 | 第76页 |
| ·重复性实验 | 第76页 |
| ·间接 ELISA 方法特异性评价 | 第76页 |
| ·临床血清样本检测（符合率） | 第76-77页 |
| ·实验结果 | 第77-80页 |
| ·pET-32a-PPRV M1 蛋白间接 ELISA 方法优化结果 | 第77-79页 |
| ·cut off 值及阴阳性判断标准确定 | 第79页 |
| ·间接 ELISA 操作程序 | 第79页 |
| ·批内重复性评价 | 第79-80页 |
| ·批间重复性评价 | 第80页 |
| ·间接 ELISA 方法特异性评价 | 第80页 |
| ·临床血清样本检测 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 第七章 全文总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
