| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| ·环境激素 | 第13页 |
| ·邻苯二甲酸酯的概述 | 第13-14页 |
| ·邻苯二甲酸酯雌激素效应的作用机理 | 第14-15页 |
| ·邻苯二甲酸酯的检测方法 | 第15-17页 |
| ·傅里叶变换红外光谱法 | 第15-16页 |
| ·气相色谱法 | 第16页 |
| ·液相色谱法 | 第16-17页 |
| ·气相色谱-质谱联用法 | 第17页 |
| ·荧光法 | 第17页 |
| ·实时荧光定量PCR技术概述 | 第17-21页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的发展 | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR反应方法的分类 | 第18-20页 |
| ·PCR反应条件的优化选择 | 第20-21页 |
| ·本课题的构成 | 第21-24页 |
| ·课题的研究目的和意义 | 第21-22页 |
| ·课题的研究内容和技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 受体的提取以及受体-PAES的复合与纯化 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验药品 | 第24-25页 |
| ·试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·鱼的驯养与投毒 | 第26页 |
| ·实验装置 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-32页 |
| ·含受体的细胞溶质的提取 | 第26-27页 |
| ·邻苯二甲酸酯-雌激素受体复合物的制备及纯化 | 第27页 |
| ·受体-配体复合物的SPR鉴定 | 第27-32页 |
| ·实验结果及分析 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第三章 受体-PAES-结合DNA复合物的制备 | 第35-49页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·实验仪器设备 | 第35页 |
| ·实验器材 | 第35-36页 |
| ·实验药品 | 第36页 |
| ·常用试剂的配制 | 第36-37页 |
| ·结合DNA的配制 | 第37-43页 |
| ·引物的合成 | 第37-38页 |
| ·引物的处理 | 第38页 |
| ·PCR反应体系 | 第38-42页 |
| ·结合DNA的回收 | 第42-43页 |
| ·定量结合DNA | 第43页 |
| ·受体-PAEs-结合DNA复合物的制备 | 第43-44页 |
| ·常规PCR反应 | 第44-47页 |
| ·邻苯二甲酸酯的常规PCR定性分析 | 第44-45页 |
| ·对照试验及结果 | 第45-47页 |
| ·有PAEs暴露与无PAEs暴露的受体量的比较 | 第47页 |
| ·小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 PAES的荧光定量PCR分析 | 第49-61页 |
| ·实验仪器、材料和试剂 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·实验材料和试剂 | 第49页 |
| ·荧光定量PCR反应条件的优化 | 第49-53页 |
| ·引物浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·退火温度的确定 | 第51-52页 |
| ·循环数的确定 | 第52-53页 |
| ·SYBRGREEN Ⅰ荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第53-56页 |
| ·溶解曲线分析 | 第56-57页 |
| ·荧光定量PCR检测PAEs | 第57-59页 |
| ·荧光定量PCR的检测限分析 | 第59-60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-61页 |
| 第五章 荧光定量PCR检测环境中的邻苯二甲酸酯 | 第61-66页 |
| ·样品前处理 | 第61-62页 |
| ·水样中邻苯二甲酸酯的提取 | 第61-62页 |
| ·鲤鱼体中邻苯二甲酸酯的提取 | 第62页 |
| ·荧光定量PCR检测环境样品中的邻苯二甲酸酯 | 第62-63页 |
| ·荧光定量PCR检测结果 | 第63-65页 |
| ·荧光定量PCR检测水样中邻苯二甲酸酯的结果 | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR检测鱼体中邻苯二甲酸酯的结果 | 第64-65页 |
| ·小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 气相色谱-质谱法检测邻苯二甲酸酯 | 第66-69页 |
| ·气相色谱-质谱法(GC-MS)技术的原理 | 第66页 |
| ·样品的前处理 | 第66页 |
| ·GC-MS条件 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-68页 |
| ·实验结果 | 第67页 |
| ·标准曲线与检出限 | 第67-68页 |
| ·结果分析 | 第68页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| 第七章 结论 | 第69-71页 |
| ·结果与讨论 | 第69-70页 |
| ·展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录Ⅰ 缩略语 | 第76-77页 |
| 附录Ⅱ PUC19序列 | 第77-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |