| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·磷酸吡哆醇氧化酶与维生素B_6代谢 | 第10-12页 |
| ·磷酸吡哆醇氧化酶的基本性质 | 第12-13页 |
| ·磷酸吡哆醇氧化酶的催化性质 | 第13-15页 |
| ·磷酸吡哆醇氧化酶活性的调控 | 第15页 |
| ·磷酸吡哆醇氧化酶的活性位点结构 | 第15-17页 |
| ·赖氨酸乙酰化修饰的研究 | 第17-19页 |
| ·赖氨酸乙酰化修饰的研究历程 | 第17-19页 |
| ·乙酰基转移酶和去乙酰化酶 | 第19页 |
| ·研究大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶的重要意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-36页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株 | 第21-22页 |
| ·PCR引物 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·试剂和仪器 | 第23-25页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第23-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·大肠杆菌W3110基因组的提取 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第26-27页 |
| ·从大肠杆菌基因组中扩增pdxH基因 | 第27页 |
| ·突变基因的PCR | 第27-29页 |
| ·酶切反应 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第31页 |
| ·蛋白质的大量表达与纯化 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度 | 第31-32页 |
| ·菌种的保存 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的透析 | 第33页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保藏 | 第33页 |
| ·蛋白质的免疫印迹(Western blotting)检测 | 第33-34页 |
| ·乙酰化蛋白的质谱鉴定 | 第34-35页 |
| ·酶活力的测定 | 第35页 |
| ·酶反应最适pH值和最适温度的测定 | 第35页 |
| ·热稳定性的检测 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| ·大肠杆菌pdxH基因的扩增和表达载体的构建 | 第36页 |
| ·大肠杆菌野生型磷酸吡哆醇氧化酶蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌野生型磷酸毗哆醇氧化酶的纯化 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶的赖氨酸乙酰化修饰的鉴定 | 第38-41页 |
| ·Western blotting鉴定磷酸吡哆醇氧化酶的赖氨酸乙酰化修饰 | 第38页 |
| ·质谱鉴定大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶的赖氨酸乙酰化修饰位点 | 第38-41页 |
| ·不同来源的磷酸吡哆醇氧化酶的多重序列比对 | 第41-42页 |
| ·定点突变基因表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·定点突变基因PCR | 第42-44页 |
| ·突变基因表达载体的构建 | 第44页 |
| ·突变体蛋白的诱导表达与纯化 | 第44-45页 |
| ·野生型和突变体蛋白的酶活力测定 | 第45-47页 |
| ·最适反应pH值的测定 | 第47-48页 |
| ·最适反应温度的测定 | 第48-49页 |
| ·热稳定性检测 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
