| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 縮略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 乙型脑炎病毒概述 | 第13-19页 |
| ·乙型脑炎病毒病原学特性 | 第13-14页 |
| ·乙型脑炎流行病学 | 第14-16页 |
| ·乙型脑炎病毒分子生物学特性 | 第16-18页 |
| ·JEV的基因组结构 | 第16页 |
| ·JEV的结构蛋白及其生物学功能 | 第16-17页 |
| ·JEV的非结构蛋白及其生物学功能 | 第17-18页 |
| ·乙脑危害 | 第18-19页 |
| 2 乙型脑炎病毒诊断技术进展 | 第19-22页 |
| ·病毒分离技术 | 第19页 |
| ·血清学诊断方法 | 第19-20页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第20-22页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 猪乙脑病毒一步法RT-PCR方法的建立与研究 | 第24-52页 |
| 1 技术路线 | 第24页 |
| 2 材料 | 第24-25页 |
| ·毒株与细胞系 | 第24页 |
| ·实验动物和病料 | 第24页 |
| ·主要试剂及配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| 3 方法 | 第25-34页 |
| ·乙脑病毒的增殖 | 第25-26页 |
| ·病料的处理 | 第26页 |
| ·病毒RNA提取方法的研究 | 第26-29页 |
| ·异硫氰酸胍提取RNA | 第26-27页 |
| ·Trizol试剂法提取RNA | 第27页 |
| ·RNA抽提试剂盒提取RNA | 第27-28页 |
| ·RNA提取方法的比较 | 第28-29页 |
| ·紫外分光光度计检测RNA纯度 | 第28页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第28-29页 |
| ·猪乙脑病毒一步法RT-PCR检测方法的建立 | 第29-31页 |
| ·引物的特异性检验 | 第29页 |
| ·引物浓度检验 | 第29-30页 |
| ·一步法RT-PCR的检验方法的初步建立 | 第30-31页 |
| ·猪乙型脑炎病毒一步法RT-PCR检测方法的研究 | 第31-33页 |
| ·一步法RT-PCR检测试剂的配制分装 | 第31-32页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法特异性的检验 | 第32页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法检测JEV的灵敏度检测 | 第32页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法的稳定性和重复性试验 | 第32页 |
| ·本方法与两步法RT-PCR的比较 | 第32-33页 |
| ·猪乙型脑炎脑病毒一步法RT-PCR方法的初步应用 | 第33-34页 |
| ·对JEV疫苗免疫小鼠的检测 | 第33页 |
| ·对人工感染乳鼠的检测 | 第33页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法与ELISA试剂盒的比较 | 第33-34页 |
| ·对临床样品的检测 | 第34页 |
| 4 结果 | 第34-48页 |
| ·Vero感染JEV后细胞倒置显微镜下进行观察 | 第34-35页 |
| ·乙脑病毒RNA提取方法研究 | 第35-37页 |
| ·一步法RT-PCR检测乙脑病毒的方法建立 | 第37-48页 |
| ·引物的设计及特异性的检测、最佳浓度的确定 | 第37-38页 |
| ·一步法RT-PCR的各个条件优化 | 第38-41页 |
| ·一步法RT-PCR检测乙脑病毒的方法研究 | 第41-44页 |
| ·检测方法特异性研究 | 第42页 |
| ·检测方法灵敏度检测 | 第42-43页 |
| ·稳定性和重复性研究 | 第43页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法与两步法RT-PCR检测结果比对 | 第43-44页 |
| ·猪乙型脑炎脑病毒一步法RT-PCR方法的初步应用 | 第44-48页 |
| ·检测疫苗免疫小鼠 | 第44-45页 |
| ·人工感染JEV小鼠的检测 | 第45页 |
| ·一步法RT-PCR检测方法与ELISA方法的比较 | 第45-47页 |
| ·对临床样品的检测 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-52页 |
| ·病料的采集和RNA的提取 | 第48页 |
| ·扩增基因的选择 | 第48-49页 |
| ·一步法RT-PCR的反应条件 | 第49页 |
| ·酶的选取 | 第49页 |
| ·检测方法的验证 | 第49-50页 |
| ·一步法检测JEV与两步法国标、ELISA的比较 | 第50-51页 |
| ·一步法RT-PCR检测乙脑人工感染、疫苗免疫和在生产临床中的应用 | 第51-52页 |
| 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录：主要试剂的配制 | 第60-61页 |
