| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 符合和缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-42页 |
| 一、环境污染物：对硝基苯酚 | 第14-16页 |
| 二、对硝基苯酚微生物降解的研究进展 | 第16-22页 |
| 三、细菌调控芳香族化合物代谢的机制 | 第22-32页 |
| 参考文献 | 第32-42页 |
| 第一章 Pseudomonas putida DLL-E4中对硝基苯酚降解基因克隆和序列分析 | 第42-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-49页 |
| ·1,2,4-苯三酚1,2-双加氧酶基因(pnpC)侧翼序列的克隆 | 第46-47页 |
| ·P.putida DLL-E4中pnp基因簇的序列分析 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 4 本章小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第二章 Pseudomonas putida DLL-E4中pnp基因簇的功能分析 | 第54-114页 |
| 第一节 PNP 4-单加氧酶(PnpA)的功能分析 | 第54-84页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-74页 |
| ·PnpA的表达和纯化 | 第60-62页 |
| ·PnpA酶学特性的研究 | 第62-66页 |
| ·PnpA的底物特异性 | 第66-67页 |
| ·PnpA催化PNP和4-硝基儿茶酚产物的鉴定 | 第67-68页 |
| ·P putida DLL-E4中pnpA的敲除 | 第68-71页 |
| ·DLL-A-aph降解特性的研究 | 第71-72页 |
| ·PnpA酶学分类地位的确定和相关功能域的预测 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-79页 |
| 4 本节小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 第二节 对苯二酚双加氧酶复合体(PnpC1C2)的功能分析 | 第84-106页 |
| 1 材料与方法 | 第84-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-100页 |
| ·pnp基因簇中HQ代谢相关基因功能验证 | 第87-89页 |
| ·PnpC1C2的表达和纯化 | 第89-90页 |
| ·对苯二酚双加氧酶复合体的体外重聚 | 第90-91页 |
| ·体内共表达对苯二酚双加氧酶复合体的催化活性 | 第91-93页 |
| ·PnpC1C2_(BL21)的底物特异性 | 第93-94页 |
| ·来源于不同表达宿主的对苯二酚双加氧酶复合体催化特性差异分析 | 第94-99页 |
| ·催化产物对PnpC1C2_(DLL-E4)活性的抑制 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-103页 |
| 4 本节小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 第三节 P. putida DLL-E4中pnp基因簇代谢对硝基苯酚和4-硝基儿茶酚的途径分析 | 第106-114页 |
| 1 材料与方法 | 第106-107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-111页 |
| ·4-NC在P. putida DLL-E4中的降解 | 第107-108页 |
| ·pnp基因簇参与4-NC的代谢 | 第108-109页 |
| ·pnp基因簇参与PNP的代谢 | 第109-111页 |
| 3 讨论 | 第111页 |
| 4 本节小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第三章 Pseudomonas putida DLL-E4代谢对硝基苯酚调控机制的研究 | 第114-138页 |
| 第一节 P. putida DLL-E4代谢对苯二酚调控机制的研究 | 第114-130页 |
| 1 材料与方法 | 第114-120页 |
| 2 结果与分析 | 第120-125页 |
| ·P. putida DLL-E4中pnpR的敲除 | 第120-121页 |
| ·DLL-△pnpR降解特性的研究 | 第121-123页 |
| ·HQ诱导下菌株总RNA提取 | 第123-124页 |
| ·RT-PCR | 第124-125页 |
| 3 讨论 | 第125-127页 |
| 4 本节小结 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-130页 |
| 第二节 P.putida DLL-E4中对硝基苯酚4-单加氧酶基因调控表达的研究 | 第130-138页 |
| 1 材料与方法 | 第130-132页 |
| 2 结果与分析 | 第132-135页 |
| ·PNP对DLL-A-aph中aph 2Ⅱ基因诱导表达 | 第132-133页 |
| ·不同代谢底物对pnpA的诱导表达效应 | 第133-135页 |
| 3 讨论 | 第135-136页 |
| 4 本节小结 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-138页 |
| 全文总结 | 第138-140页 |
| 本文主要创新之处 | 第140-142页 |
| 附录一 文中所用的试剂、培养基及相关缓冲体系配方 | 第142-144页 |
| 附录二 博士期间发表论文 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146页 |
